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兔出血症病毒WHNRH株全基因组测序全长cDNA克隆,VP60基因及全病毒真核表达载体构建

李建文

  兔病毒性出血症是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)引起兔的一种急性、烈性、高致死性传染病,是一种毁灭性传染病,给养兔业造成巨大的经济损失。1984年我国首先爆发兔病毒性出血症,目前呈全国性分布,2004年GenBank登录了第一株中国株RHDV的全基因组序列,我国RHDV的分子流行病学资料非常缺乏,且迄今国内仍未见RHDV基因组序列测定的详细报道。目前国内外还没有RHDV反向遗传学和核酸疫苗的相关研究报道。鉴于此,本研究主要包括以下几个方面:1.兔出血症病毒WHNRH株的分离鉴定:采用病死兔的肝脏组织进行病原的分离,将其经兔体传3代后接种兔呈规律性死亡和病理变化,其特征与兔病毒性出血症相同,采用氯仿处理,聚乙二醇沉淀法对第4代死亡兔肝脏组织进行处理,所得产物具有血凝特性,其血凝效价可达2~(16),该血凝作用能够被抗RHDV的高免血清所抑制,该产物能够与抗RHDV的高免血清在琼脂扩散实验中形成清晰可见的沉淀线,将该液体经磷钨酸染色后进行电镜观察,结果发现该产物中存在一种大小约为30-40nm、无囊膜,符合RHDV形态特征的病毒粒子。参考GenBank中登录的兔出血症病毒的基因组序列,在保守区设计一对RHDV特异的PCR引物对该分离病毒进行RT-PCR扩增,结果扩增出与预期片段大小相符的PCR条带,对产物的克隆测序结果表明,该株病毒与已经报道的RHDV的对应区域的同源率达90.2%-97.2%,从分子水平证实本研究分离毒株为兔病毒性出血症病毒(RHDV),将其命名为WHNRH株。2.兔出血症病毒WHNRH株基因组序列的测定与分析:采用片段重叠的……   
[关键词]:兔出血症病毒;WHNRH株;分离鉴定;基因组测序;全长cDNA克隆;VP60;表达载体
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:四川农业大学2006年