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鳄龟抗菌肽的分离纯化和抗菌效果研究

李思明

  抗菌肽是近年来研究发现的新一代抗菌剂,对生物体免疫有重要作用。但爬行动物的相关研究还未见报道。本文初步研究鳄龟肠道、血液、肝脏和皮肤组织粗提物的抗菌活性,在此基础上进一步研究了鳄龟血液抗菌肽的分离纯化过程及其相关性质。研究包括四个试验。试验一、鳄龟不同部位抗菌物质的初提本实验采用硫酸铵提取法和改进的乙酸提取法两种不同的方法从诱导后的稚鳄龟肠道、血液、肝和皮肤组织内分离抗菌肽,研究鳄龟体内产生抗菌肽的能力及抗菌效果。其中乙酸浸提法成功分离出具有抗菌活性的抗菌肽粗提物。用嗜水气单胞菌和沙门氏菌为指示菌,结果显示血液和肠提取物的抗菌效果明显,肠提取物的抗菌圈大于血液提取物的抗菌圈,但肝和皮肤组织的提取物未观察到抗菌圈。由此可见,抗菌物质在血液和肠组织中含量较多,在皮肤和肝脏中抗菌成分的含量比较少。试验二、诱导剂量对幼鳄龟血液抗菌活性物的影响将鳄龟随机分成四组,每组4只。第一组,注射0.5ml生理盐水;第二、三、四组分别腹腔注射灭活致病性嗜水气单胞菌1×10~9个/ml菌液0.1ml/只,0.3ml/只,0.5ml/只;各组分别在诱导后12h尾静脉采血。本研究采用改进的Tris-HCl缓冲液提取鳄鱼龟血液抗菌肽类物质,第一组、第二组、第三组和第四组的粗制品对大肠杆菌、沙门氏菌、嗜水气单胞菌的杀菌率分别为41.7%,56.7%,63.0%和68.8%;53.3%,61.5%,78.0%和88.9%;56.1,67.5%,83.9%和98.1%。但鳄龟血液粗制品对3株菌的抑菌圈不明显。由此可见,诱导组比对照组效果好,且杀菌效果随诱导剂量的增加而提高。抗菌肽粗制品经过PAGE电泳后,可见高剂量组电泳条带颜色明显比低剂量组深,说明高剂量诱导组的蛋白质含量比底剂量组高。试验三、鳄龟血液抗菌肽的分离纯化本研究采用Sephadex G-50凝胶柱过滤层析鳄龟血液抗菌肽,层析柱规格为2.6×100cm,洗脱液为0.5%的甲醇,流速为0.5ml/min,1管/10min。分离纯化效果比较理想,峰之间区分得非常明显,其活性峰为Ⅳ峰的26-30管,其中第28管的抗菌活性最强。聚丙烯酞胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳结果表明,电泳图谱均为单一条带,说明分离的鳄龟血液抗菌肽已经达到电泳纯,其分子量约为6000 Da—……   
[关键词]:鳄龟;抗菌肽;分离纯化;抗菌活性;最小抑菌浓度
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2006年