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规模化养鸭场雏鸭致病性大肠杆菌的分离、鉴定和耐药性研究

李玲

  从1999年以来自四川、重庆等13个不同地区的规模化养鸭场具有典型大肠杆菌病临床症状和病理变化的5-35日龄雏鸭分离出272株大肠杆菌,经对雏鸭的人工感染实验表明有很强的致病性,应用微量平板凝集试验共鉴定出213株分离菌的O抗原血清型,分属于29个血清型,以O_(76)、O_(78)、O_(92)、O_(93)、O_(149)、O_(142)为主要优势血清型,占总分离菌株的41.89%。O_(51)、O_(59)和O_(79)血清型在我国禽类中还未见报道过。不同地区的致病性大肠杆菌的血清型有很大差异,其中绵阳地区最复杂,共11种血清型,其次是广汉,有8种。对其中113株进行33种抗生素敏感性试验结果表明,分离菌存在广泛的耐药性,以多重耐药性为主,最多耐药21种,以13耐、15耐、11耐、7耐、9耐、12耐为主,共占53.0%。最为敏感的药物是头孢类药物、阿米卡星、妥布霉素、氨曲南、壮观霉素、奈替米星、亚胺配能、庆大霉素等,耐药率在20%以内;而氨苄青霉素、四环素、强力霉素、萘啶酸、利福平等均不敏感,耐药率均在80%以上。并且耐药率从1999年到2005年逐年上升,其中变化较大的是诺氟沙星(41.2%→60.2%)、哌拉西林(51%→80%)和头孢呋新(6.8%→20%)。挑选了18株耐环丙沙星、氧氟沙星和恩诺沙星的氟喹诺酮类药物的菌株,多重PCR扩增其耐药基因gyrA QRDR、parC QRDR和marOR,均扩增出特异性带,分别是205bp、462bp、409bp。对gyrA QRDR区限制性内切酶HinfI酶切分析,有15株的83位Ser位点的改变使细菌对喹诺酮类药物产生耐药。对parC QRDR区进行SSCP分析,表明parC QRDR区的突变促使细菌的耐药程度增加。然后筛选两株对氟喹诺酮类药物高耐、同时耐多种抗菌药物的菌株,对其marOR区测序,与GenBank公布的ATCC25922 marOR基因序列作比较,发现氨基酸差异,分别是Arg27→Leu(1525g→t)、Trp83→Leu(1693 g→t)、Gly103→Asp(1752g→a)和Tyr137→His(1854t→c)。较为有意义的突变是Trp83→Leu(1693g→t),可能引起MarR构象改变而使其丧失阻遏功能,影响MarR与DNA的结合,造成MarA的过度表达,在大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药和多重耐药中起一定作用。……   
[关键词]:雏鸭致病性大肠杆菌;分离;血清型鉴定;药敏试验;氟喹诺酮类药物;gyrA;ParC;marOR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2006年