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长春花组织与细胞培养及其吲哚生物碱合成与调控的研究

赵剑

  由于长春碱类双吲哚生物碱的广泛的临床应用而植物原料中这些化合物含量极微,以及近年来又开发出疗效好但毒性低的半合成抗癌药长春瑞宾,长春花生物碱的组织与细胞培养法生产的研究又渐趋活跃。本文对长春花组织与细胞的培养和长春花生物碱的生物合成及调控做了系统的研究。1.建立了RP-HPLC同时测定长春花组织细胞培养物中的蛇根碱、阿玛碱、长春质碱和文多灵及色胺的方法。用分析柱Nucleosil 5 C18柱(250×4.6mm,5μm,Phenamenex,USA),流动相:甲醇—乙腈—0.025 mol/L乙酸铵—三乙胺(15:40:45:0.1),在280 nm紫外检测下,成功地分离和测定了长春花组织培养物中的色胺,蛇根碱,阿玛碱,文多灵,长春质碱;为进行组织与细胞培养生产长春花生物碱提供了准确、灵敏、可靠的分析方法。DAD分析结果说明,各生物碱的色谱峰的紫外吸收光谱与标准品的相同,各点扫描的纯度分析也表明各色谱峰的纯度达到要求。2.用不同长春花植株的茎叶诱导形成愈伤组织,建立了几个优良愈伤组织系。在添加2,4-D或NAA与KT或6-BAP的不同组合的MS、B5、6,7-V等基本培养基上均可诱导出愈伤组织,愈伤组织具有高的生物碱合成能力。在继代扩繁的基础上,进行高产愈伤组织系的筛选,得到2个阿玛碱和蛇根碱含量高的组织愈伤繁殖系P2和P5,培养基种类。糖源、氮源、激素、光照对愈伤组织生长和生物碱合成的影响试验表明:2,4-D明显抑制生物碱合成,同时抑制组织中过氧化物酶活性;而光照刺激生物碱的合成,同时提高过氧化物酶活性。高浓度的蔗糖和葡萄糖明显促进生物碱的合成,而增加培养基中氮源和磷源浓度可显著抑制生物碱合成,但促进愈伤组织的生长。3.在叶片诱导愈伤组织脱分化过程中,文多灵含量迅速下降,长春质碱含……   
[关键词]:长春花生物碱;文多灵;蛇根碱;阿吗碱;镁肥;愈伤组织系;吲哚生物碱;长春质碱;真菌诱导子;培养(生物);细胞培养;调节控制;调控
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国协和医科大学1999年