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水产品中己烯雌酚残留检测方法学研究

沈美芳

  己烯雌酚是一种作用较强的人工合成雌激素类似物,是我国水产养殖禁用药物,残留监控重点药物,因此,建立快速、准确的水产品中己烯雌酚残留检测方法具有重要意义。本文对己烯雌酚的竞争酶联免疫检测方法及气相色谱—质谱法定性、定量检测水产品中己烯雌酚残留技术进行了研究。一、己烯雌酚ELISA检测技术研究采用氯乙酸钠法在DES半抗原中引入一元羧甲基,并对反应产物进行定性、定量分析,一元羧甲基DES纯度达95%以上;用CDI法将一元羧甲基DES和牛血清白蛋白合成DES-BSA抗原,DES与BSA偶联比例为14:1;5只新西兰大耳兔用此抗原免疫5次后,抗血清经(NH4)2S04沉淀和Sephedex-G-200层析后收集纯化抗体,通过ELISA试验证明纯化后的IgG效价达1:30000;一元羧甲基己烯雌酚在碳化二亚胺的作用下与辣根过氧化物酶相偶联,制备了辣根过氧化物酶标记物DES—HRP,经对酶标记物的酶活性、酶免疫活性鉴定,结果表明:制备的酶标记物具有很好的酶活性和免疫活性,经过光谱分析,己烯雌酚与辣根过氧化物酶的偶合比例为10.92:1,酶标记物的最佳工作浓度为1/6400稀释;用包被液将抗血清做1:500稀释,加入96孔酶标板中,各孔依次加入20μL DES标准系列液和DES—HRP标记物,最后加底物、终止液并读数,建立DES的标准曲线。通过对试验条件的优化,初步建立了检测DES残留的竞争ELISA法。该方法的线性范围50—400ppt,变异系数为15.68%,具有一定的灵敏度,较好的稳定性。二、GC-MS检测水产品中己烯雌酚残留技术研究采用基质固相扩散和固相萃取结合的方法提取水产品中残留的己烯雌酚,经净化后,用BSTFA作为衍生化试剂衍生,气相色谱—质谱联用(选择离子模式,选择离子质荷比为:383、397、412、413)对衍生物进行定性、定量分析,建立了水产品中己烯雌酚残留的气相色谱—质谱检测方法,并对该方法进行了验证。……   
[关键词]:水产品;己烯雌酚;ELISA;GC-MS;残留
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2005年