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孕酮、γ-氨基丁酸诱发马鹿精子顶体反应及对离子转运调节的研究

任艳玲

  体外受精技术是继人工授精、胚胎移植技术之后,动物繁殖领域的第三次革命,具有广阔的发展前景和重要的现实意义。精子体外获能和顶体反应是体外受精的前提和基础,因此对精子体外获能和顶体反应进行研究有助于体外受精技术的深入开展。本研究以马鹿为试验对象,采用上浮法诱导马鹿精子体外获能,以孕酮(P4)和γ-氨基丁酸(GABA)诱导顶体反应,旨在摸索出P_4与GABA诱发马鹿精子顶体反应的最适宜体系,并通过研究二者在诱发马鹿精子顶体反应过程中对Ca~(2+)、Mg~(2+)、Na~+、K~+、Cl~-和总P等离子的转运调节,以期初步阐明二者诱发马鹿精子顶体反应的机制。试验结果表明:1、0.5μmol/L~1000μmol/L的P_4可提高获能马鹿精子的顶体反应率;其中,1μmol/L与10μmol/L P_4可显著(P<0.05)促进马鹿精子发生顶体反应,并以10μmol/LP_4处理组的顶体反应率最高,达到74.44±0.71%。2、10μmol/L P_4诱导获能马鹿精子顶体反应,在10~20min的处理时间内均获得了较高的顶体反应率(均72.41%以上),并以处理10min的项体反应率最高(78.40%)。3、0.05mmol/L~2.5mmol/L的GABA可提高获能马鹿精子的顶体反应率;以0.5mmol/L GABA处理组的顶体反应率最高(P<0.01),达到77.94±6.53%。4、0.5mmol/L GABA诱导获能马鹿精子项体反应,在1~30min内各时间的顶体反应率均达到70%以上:其中处理10min的顶体反应率最高,达到77.52+2.96%。5、P_4与GABA可协同诱导获能马鹿精子发生顶体反应,适宜的浓度组合为1μmaol/L P_4+2.5mmol/L GABA。6、P_4与GABA均能促进获能马鹿精子的顶体反应,但均不能显著(P>0.05)促进未获能马鹿精子的顶体反应。7、P_4与GABA对马鹿精子获能均无显著作用(P>0.05);延长获能孵育时间对GABA诱发的顶体反应有极显著影响(P<0.01)。8、在P_4诱导马鹿精子顶体反应的15min内,培养液中Ca~(2+)、Mg~(2+)、Na~+、K~+、Cl~-和总P的浓度均发生了变化;其中Ca~(2+)、Mg~(2+)、Na~+和总P的变化水平为显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);K~+和Cl~-出现波动,但无显著变化(P>0.05);Ca~(2+)出现两个阶段的内流,一个是60s内出现的快速、瞬时内流,另一个是180s后出现的缓慢、持续内流。9、在GABA诱导马鹿精子顶体反应的15min内,培养液中Ca~(2+)、Mg~(2+)、Na~+、K~+、Cl~-和总P的浓度均发生了变化,且变化水平均为显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);Ca~(2+)在顶体反应初期出现短暂外流后均呈内流状态;Mg~(2+)、Na~+、K~+和总P均呈内流趋势。……   
[关键词]:马鹿;精子;顶体反应;孕酮;γ-氨基丁酸;离子转运
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北林业大学2006年