手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

喹烯酮残留标示物的ELISA检测方法研究及半抗原设计与合成

晁博

  我国自主研制的喹噁啉类新兽药喹烯酮,具有毒性小、活性高的优点,属高效、安全的饲料添加剂,但因作为兽药使用,仍需考虑其通过食物链作用对人体产生的不良影响,故也需建立该化合物在动物可食用组织中残留的快速、灵敏的检测方法。本论文通过抗原和抗体的制备及半抗原的改造,进行了在动物可食用组织中喹烯酮残留的ELISA快速检测的方法学研究。本论文研究首先以邻硝基苯胺为起始原料,经四步反应获得了高纯度的残留标示物3-甲基-喹噁啉-2-羧酸(MQCA)。并利用其分子结构中已有的羧基为偶联位点,以碳二亚胺法和蛋白进行偶联,完成了两种偶联物的制备(MQCA-BSA、MQCA-RSA),经紫外光谱法鉴定偶联成功。以两种偶联物为不同免疫原、采用不同的免疫时间间隔免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,抗体效价测定和特异性鉴定的实验结果表明:两种免疫原均能产生高效价的抗体,免疫间隔延长有利于效价提高,且以RSA为载体有利于避免针对蛋白载体的抗体产生。但间接竞争性ELISA法对抗体的灵敏度测定结果表明,IC_(50)值较高,不能满足残留检测的要求。本论文认为导致ELISA检测灵敏度较低的原因,是残留标示物和蛋白偶联后的特征结构发生改变,诱导产生的抗体不能够对游离MQCA很好的识别,因此,本论文设计了能够最大化保留MQCA结构特征的系列半抗原结构,并对其合成路线进行了筛选和优化,最终以对甲基邻硝基苯胺为起始原料,经氧化环化、溴代、水解、Beirut缩合、还原、水解六步反应制备含羟甲基结构的MQCA衍生物7-羟基甲基-3-甲基-喹噁啉-2-羧酸,为制备对游离残留标示物高亲和力的抗体,高灵敏度的ELISA残留检测方法的建立奠定基础。……   
[关键词]:喹烯酮;ELISA;抗体;半抗原;化学合成
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业科学院2006年