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虎杖组织培养物中白藜芦醇和虎杖苷的代谢调控、生物转化及其提取液抗肿瘤活性筛选研究

于树宏

   虎杖(Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.)为多年生蓼科草本植物,在我国广泛分布于秦岭以南地区,根或根茎入药。药理学研究表明,虎杖中所含的白藜芦醇和虎杖苷,是具有多种药理作用的活性化合物,被誉为“二十一世纪最有前途的抗癌药物之一”。目前市售的白藜芦醇和虎杖苷主要是从野生虎杖中提取,极易造成资源匮乏。为了实现该药用植物资源的可持续利用,本人系统地开展了虎杖的生物技术研究,包括组织培养、遗传转化、活性成分的代谢调控以及生物转化等,并对组织培养物提取液的抗肿瘤活性进行了初步筛选,取得的主要结果如下: 1建立了虎杖快速无性繁殖体系通过植物组织培养的方法,建立了适宜扩大培养的无性繁殖体系流程,可在短期内持续收获优质虎杖种苗。筛选并确定了诱导幼芽分化的培养基为MS+0.05mg/L TDZ+0.5mg/L NAA;促进幼苗生长的培养基为MS+0.1mg/L CPPU+1.0mg/L NAA+0.5%活性炭;快速生根及壮苗的培养基为1/2MS+1.0mg/L NAA+0.5%活性炭。以无菌组培苗幼芽为起始材料,经过器官增殖培养途径,2~3周内可获得发育良好的完整植株,繁殖系数为5~7,炼苗移栽成活率为100%。 2成功诱导愈伤组织并建立了细胞悬浮培养体系茎段比叶柄、叶片更容易诱导愈伤组织的形成,诱导培养基为MS+0.5mg/L CPPU+0.2mg/L NAA。愈伤组织增殖培养基为SH+0.05mg/L TDZ+1.0mg/L NAA。受到光照、培养基组成等条件的影响,愈伤组织在继代过程中可形成生长速度、形态特征以及有效成分含量不同的品系。选取黑暗条件下生长旺盛、结构疏松的白色愈伤组织,经过摇瓶培养和反复继代筛选,分离获得了胚性的细胞悬浮培养系。 3实现了虎杖毛状根的高频诱导与离体优化培养利用发根农杆菌Ri质粒遗传转化技术,首次实现了虎杖毛状根的高频诱导。以毛状根的诱根率和诱根密度作为转化效率的评价指标,探讨了……   
[关键词]:虎杖;组织培养物;白藜芦醇;虎杖苷;代谢调控;生物转化;药理活性筛选
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:河北医科大学2006年