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短短芽孢杆菌XDH的鉴定及其抗菌物质的分离、纯化与部分性质研究

薛东红

   a’311菌株是本实验室从泰山土壤分离获得的一株拮抗细菌。该菌株对多种动、植物病原细菌和真菌如:大肠杆菌、鸡巴氏杆菌、金黄葡萄球菌、黑胸败血病菌、棉花枯萎病菌、黄瓜枯萎病菌、茶轮斑病菌等有较强拮抗作用,该菌株抑菌谱广,菌株发酵性状优异,发酵液性质稳定,显示了诱人的开发前景。本文通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定和16S rDNA序列分析,对该菌株进行了鉴定。选择了适合该菌株的发酵条件,并通过硫酸铵沉淀、Sephadex G-50柱层析、高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)分析,对抗菌物质进行了分离纯化,并研究了其部分性质。主要内容如下: 1通过菌体形态特征观察、生理生化指标测定、16S rDNA序列及其系统进化树分析,鉴定a’311菌株为短短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),命名为短短芽孢杆菌XDH。该菌株的16S rDNA序列已在美国Genbank注册,登录号为DQ279738。 2筛选到一个适合该菌株的发酵条件。培养基配方:葡萄糖16g,可溶性淀粉2.5g,蛋白胨10g,黄豆饼粉26g,玉米浆1.0g,NaCl7.5g,(NH4)2SO4 4.0g,蒸馏水1000mL。30℃,200rpm,装液量50mL/250mL,摇瓶振荡培养48h。 3发酵液经40%饱和度硫酸铵盐析和Sephadex G-50柱层析,可将有效物质与其他组分进行粗分离。以乙腈-0.1%TFA水溶液和甲醇-0.4%乙酸水溶液为流动相,选择合适的HPLC条件,确定最佳HPLC条件为甲醇:0.4%乙酸(28:72,v/v),色谱柱Kromasil C18柱(250×4.6mm,5μm),流速1.0mL/min,柱温30℃,270nm检测。HPLC分析结果表明,得到至少A、B两个有效组分,其保留时间分别是6.225min和10.899min,这使得抗菌物质的分离纯化更进一步。质谱分析表明,A、B两组分的分子量分别是218和392。 4抗菌物质粗品在水、甲醇、乙醇中溶解度较大,丙酮和乙醚中次之,在氯仿和苯中不溶解;茚三酮反应为阴性;耐高温;对酸敏感;对蛋白酶和紫外线照射不敏感;在270nm和220nm附近有最大紫外吸收。 5该菌株抑菌谱广,对多种病原细菌和真菌有拮抗作用。其中,抗菌……   
[关键词]:短短芽孢杆菌;鉴定;抗菌物质;分离;纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2006年