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布鲁氏菌种特异性单克隆抗体的研制和抗原捕捉ELISA方法的建立

梅建军

  本研究选用两株光滑型布鲁氏菌B.abortus 544A和B.melitensis 16M,采用热酚法和酚-甲醇法提取纯化了二者的LPS和O链抗原,选择SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶免疫扩散试验对提纯的产物进行了鉴定;用B.abortus544A和B.melitensis 16M各免疫5只Balb/C健康雌性小鼠,经4次免疫后,取脾脏做细胞融合,用提纯的LPS和O链抗原筛选阳性细胞孔,对阳性细胞孔进行了3~4次克隆,经扩大培养后,制备单抗腹水,并对单抗的特性进行了分析,结果表明:4B8、1C9、1G9、1E2单克隆抗体株是针对A抗原的单抗;3C6单克隆抗体株是针对M抗原的单抗;2D10和1E10可能是针对C抗原的单克隆抗体。通过对单因子血清的包被条件、单抗作用条件、酶标二抗作用条件及底物显色条件等的优化,运用4B8和2D10分别建立了检测牛种和养种布鲁氏菌的夹心ELISA方法,对建立的ELISA方法进行了特异性和敏感性检测,同时应用所建立的ELISA方法对模拟样品和实际样品进行了检测,符合率均为100%。……   
[关键词]:布鲁氏菌;LPS;O链;单克隆抗体;夹心ELISA
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:吉林大学2006年