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临床分离鸡源性大肠杆菌分型及其耐药性检测和质粒DNA分析

韩伟

  试验主要研究保定、秦皇岛和北京三个地区集约化养鸡场临床分离的鸡源性大肠杆菌的主要生物学特性、耐药性、外膜蛋白(Omp)分型和质粒DNA的分析。通过细菌生化试验鉴定,临床分离出38株鸡源性大肠杆菌。采用玻片凝集试验和试管凝集试验相结合的方法,对38株大肠杆菌进行O血清型鉴定,33株大肠杆菌确定了O血清型,分属6种血清型,分别为O_2、O_(18)、O_(93)、O_(76)、O_(78)和O_(88),占分离菌株的86.84%,5株未能定型;其中,流行的主要血清型为O_(15)(34.21%),O_(76)(15.79%)和O_(88)(19.42%),共26株,占定型菌株的78.79%;鸡源性大肠杆菌血清型众多,分布复杂,地区差异较大,O血清型鉴定为更好的预防大肠杆菌病提供科学根据。按世界卫生组织(WHO)推荐的Kirby-Bauer菌液涂布法对38株大肠杆菌进行24种抗生素的药物敏感性试验,结果表明:38株大肠杆菌均有不同程度的耐药,而且均表现多重耐药;较为敏感的抗生素是头孢菌素类和氨基糖苷类抗生素,其中以阿米卡星、头孢唑啉、头孢拉定、头孢哌酮和头孢三嗪最为敏感;对青霉素类抗生素、林可胺类抗生素、四环素类抗生素和大环内酯类抗生素耐药严重,其中以麦迪霉素、林可霉素、氨苄青霉素、四环素和阿莫西林耐药性最为严重;药物敏感试验为保定、秦皇岛和北京三个地区养鸡业提供科学的用药指南,为药物防治提供科学依据。另外,采用超声波裂解和N-十二烷基肌胺酸钠进行外膜蛋白(Omp)的提取,利用SDS-PAGE进行Omp分型,结果38株鸡源性大肠杆菌共出现3种Omp型,分别为Omp-Ⅰ型、Omp-Ⅱ型和Omp-Ⅲ型,其中以Omp-Ⅰ型为主,其中Omp-1型为O_(78)、O_(88)、O_2、O_(18)、O_(93)、O_(76)5个血清型分离株所共有,Omp-Ⅱ型多为O_(76)血清型分离株,Omp-Ⅲ型为O_(93)、O_(78)、O_(88)、O_2分离株所共有,说明不同血清型间有相同的Omp型,而相同血清型间Omp型可以不同,O血清学分型法不能完全反映菌株之间的遗传相关性。最后,采用碱裂解—中和法对38株大肠杆菌进行质粒DNA抽提,对质粒进行琼脂糖凝胶电泳分析,结果38株菌株的质粒获得率为100%;对菌株进行质粒分型,共分为23种质粒谱型;来源相同的菌株质粒DNA图谱有的相同或相似,有的差异较大;来源不同的菌株质粒DNA指纹图谱一般不同,但也有的相同;用HindⅢ和EcoR Ⅰ两种内切酶对质粒进行酶切,进一步证实了质粒图谱分析的结果。质粒DNA图谱分析为从分子水平上进行鸡大肠杆菌病流行病学调查提供了基础材料。……   
[关键词]:大肠杆菌;O血清型;药敏试验;外膜蛋白;质粒图谱
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北农业大学2006年