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丁酸梭菌培养与发酵动力学以及调节腹泻小鼠肠道菌群平衡的研究

孔青

  本论文从丁酸梭菌的菌体形态、生理生化和16S rRNA序列分析菌种鉴定开始,在此基础上,系统研究了丁酸梭菌培养条件的优化,并建立了丁酸梭菌分批发酵和补料分批发酵的动力学模型;另外,在体外研究了丁酸梭菌的耐酸、耐胆汁特性,并在体内研究了丁酸梭菌和青春双歧杆菌、粪肠球菌混菌调节抗生素引起的腹泻小鼠肠道菌群平衡的作用。论文的主要研究结果如下: 利用伯杰氏细菌分类鉴定系统和16S rRNA序列分析的鉴定方法对实验室保存的丁酸梭菌进行鉴定,通过设计引物并将扩增出的16S rRNA序列在National Center Biotechnology Information(NCBI)上使用BLASTN程序进行比对,尝试了一种丁酸梭菌分子鉴定的快速、准确方法: 研究了丁酸梭菌的耐酸、耐胆汁特性,通过和其它几种常用益生菌体外实验的比较,证明丁酸梭菌比乳杆菌、肠球菌、双歧杆菌更耐酸、更耐胆汁浓度,这个结论表明了丁酸梭菌更能耐受肠道环境、能在肠道停留更长时间,具有很好的应用价值; 利用响应面实验设计的科学方法对丁酸梭菌的培养条件进行系统优化,最终确定培养丁酸梭菌的种子培养基为:2.44%葡萄糖(w/v),2.08%酵母浸膏(w/v),1%胰蛋白胨(w/v),0.1%(NH_4)_2SO_4(w/v),0.1%NaHCO_3(w/v),0.02%MnSO_4·H_2O(w/v),0.02%MgSO_4·7H_2O(w/v),0.002%CaCl_2(w/v)和2%琼脂(w/v)(配固体培养基时用),初始pH为8.55,丁酸梭菌在此培养基中厌氧培养24小时后活菌数可达1.03×10~9 CFU/mL:培养丁酸梭菌的发酵培养基为:2%葡萄糖(w/v),3.98%豆饼粉提取液,0.1%(NH_4)_2SO_4(w/v),0.124%NaHCO_3(w/v),0.37%玉米浆(w/v),0.02%MnSO_4·H_2O(w/v),0.02%MgSO_4·7H_2O(w/v),0.002%CaCl_2(w/v)和2%琼脂(w/v)(配固体培养基时用),初始pH为7.5,丁酸梭菌在此培养基中厌氧培养24小时后活菌数可达7.1×10~8CFU/mL,筛选出合适的培养基配方,为下步的研究以及今后大规模的生产提供依据; 首次考察了丁酸梭菌在5 L发酵罐中自然分批发酵动力学过程,并建立了相关模型,实验中采用Logistic方程描述了菌体生长的动力学过程,采用Leudeking-Piret方程描述了产物合成的动力学过程,用Leudeking-Piret-Like方程描述了底物消耗的动力学过程,从检验结果可知,模型可以较好的(尤其在发酵的前20小时内)解释实际发酵中细胞生长、底物利用和产物合成的动力学规律。所得模型方程如下: 细胞生长模型:(dx)/(dt)=0.1812(1-x/1.64)x 底物消耗模型:-(dS)/(dt)=9.0603(dx)/(dt)+0.00967x 产物合成模型:(dP)/(dt)=3.17(dx)/(dt)+0.00175x;……   
[关键词]:丁酸梭菌;分批发酵动力学;补料分批发酵动力学;益生菌;肠道菌群
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:浙江大学2006年