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神经干细胞对去血清诱导PC12细胞凋亡的作用

朱蕾蕾

  中枢神经系统疾病大都是因为不同程度的细胞凋亡而诱发的,如帕金森病(Parkinson s disease,PD),主要是由于中脑黑质多巴胺(Dopamine,DA)能神经元变性坏死所致。近年来,随着神经科学的飞速发展,神经干细胞(Neural stem cells,NSCs)的移植已成为治疗神经系统疾病最有前景的治疗手段。肾上腺嗜铬细胞(PC12 cells)可分泌多巴胺,在去血清诱导后,其凋亡与多巴胺能神经元的凋亡有许多共同之处,因此可以通过体外PC12细胞去血清凋亡模型,研究在体的一些情况。本实验旨在通过研究NSCs对去血清诱导的PC12细胞凋亡的影响,进一步为通过NSCs移植来治疗神经系统疾病提供相应的实验和理论依据。实验采用海藻酸钙胶珠化的NSCs与去血清培养的PC12细胞共培养,通过CCK-8细胞活性检测法、Hoechst 33342染色法、AnnexinV/PI双标以及PI细胞周期流式定量分析,对不同实验组细胞的活性、形态、凋亡率及细胞周期进行比较;同时使用GDNFELISA试剂盒检测培养基中胶质细胞源神经营养因子(glial derived neurotrophic factor,GDNF)含量;并对胶珠的破囊工艺进行了优化。结果表明:①从CCK-8细胞活性检测分析,NSCs对去血清后PC12细胞的存活率有明显的促进作用。②从形态学上观察,NSCs对去血清诱导的PC12细胞凋亡有明显的抑制作用,减少染色体浓缩及凋亡小体个数。③由流式细胞仪对细胞周期的分析,去血清诱导后,PC12细胞大部分滞留在G1期,细胞向S期过渡受阻;而与NSCs共培养后,PC12细胞凋亡率显著降低,减少了由去血清引起的PC12细胞阻滞现象,G1期细胞向S期和G2期过渡基本未受阻断。④培养基中有GDNF,与由去血清诱导凋亡的PC12细胞共培养的神经干细胞分泌GDNF能力增强。⑤确定了最佳的成囊和破囊工艺为:1.5%(wt%)海藻酸钠,1.5%(wt%)CaCl_2,成囊反应时间选择为10min;柠檬酸钠与海藻酸钠和培养基混合液的体积比选择为2:1,破囊时间为7min。由此可见,将神经干细胞与去血清诱导凋亡的PC12细胞共同培养,能够抑制PC12细胞的凋亡,提高其存活率;神经干细胞对PC12细胞的保护作用主要是通过其自身分泌的营养因子GDNF来阻止其凋亡。因此,将神经干细胞用于预防治疗神经系统疾病有着光明的前景,是治疗PD疾病的重要手段之一。……   
[关键词]:PC12细胞;凋亡;神经干细胞;共培养;胶质细胞源神经营养因子
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:大连理工大学2006年