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表达Mn14-sod基因酵母工程菌的构建及其表达条件的研究

王爽

  超氧化物歧化酶(SOD)是一种金属酶。根据其活性位点结合的金属离子不同,SOD可分为CuZn-SOD、Fe-SOD和Mn-SOD以及最近发现的Ni-SOD和FeZn-SOD。由于SOD可以使超氧阴离子自由基歧化生成过氧化氢和分子氧,从而在防止氧化胁迫方面发挥重要作用。蜡质芽孢杆菌M22菌株(Bacillus cereus M22)是本实验室从植物体内分离的对多种植物病害有良好防治效果的生防细菌。前期研究发现其代谢液及胞内SOD含量较高,推测SOD可能在M22定殖过程中以及在病害防治中发挥重要作用。根据已克隆的M22菌株Mn14-SOD的基因序列,设计特异引物,扩增Mn14-sod基因的编码框序列。将扩增产物插入到酵母分泌表达载体pPICZαA中,构建重组质粒pPICZαA-sodMn14,然后电激转化酵母细胞。经Zeocin~(TM)抗性筛选、PCR鉴定得到含Mn14-sod基因的阳性转化子;当用PAGE电泳检测它们的表达产物时,其中只有3株重组菌株P_(MSA)、P_(MSB)和P_(MSC)的发酵上清液中能够直接检测到具有活性的重组SOD蛋白。通过摇瓶实验,对重组毕赤酵母菌株PMSA的表达条件进行了研究,最终确定了诱导前细胞光密度值OD_(600)为10,甲醇添加量为1%,诱导72小时后发酵上清原液中酶活力可达211U/mL。……   
[关键词]:Mn14-SOD;蜡样芽孢杆菌;毕赤酵母;工程菌;表达
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业大学2005年