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假单胞菌SPF-1产铁载体条件及其铁载体性质研究

陈绍兴

  本文采用CAS检测方法检测Pseudomonas sp.SPF-1菌株产铁载体的基本特征,并且通过测定铁载体圈或者荧光圈直径与菌落直径的比值法、紫外-可见光连续波长扫描法、△OD_(630)、OD_(600)、OD_(400)光谱吸收等方法对Pseudomonas sp.SPF-1菌株产铁载体条件、铁离子对其产铁载体能力的影响进行了研究,并且分离纯化了Pseudomonas sp.SPF-1菌株铁载体并对其性质进行了初步分析。结果显示:Pseudomonas sp.SPF-1菌株具有在通用CAS平板较快、较强的产圈特性;产铁载体的最适的温度为28-30℃,最适的pH值为7.5-8.0,并且通气量越充分,铁载体分泌量越大;通过与其它7株假单胞菌产铁载体比较,发现不同株假单胞菌存在较大的差异,Pseudomonas sp.SPF-1菌株在产铁载体特别在产荧光铁载体能力方面较强;通过在培养基配方的比较研究,发现蔗糖-天冬氨酸(MSA)培养基较通用CAS培养基更加灵敏,特别适于荧光铁载体的检测。超过1μM的铁离子可以促进Pseudomonas sp.SPF-1菌株的生长但是严重抑制其铁载体的分泌,其中在液体培养基内效果比固体培养基内更加明显;同时2-4μM的铁离子螯合剂可以促进铁载体的分泌,而二价阳离子螯合剂没有效果;并且发现荧光铁载体与非荧光铁对铁离子的应答存在差异,且荧光铁载体在铁离子应答方面较非荧光铁载体灵敏;用Sephadex G-25对Pseudomonas sp.SPF-1铁载体进行分离纯化,初步的性质研究显示:其分泌的铁载体是水溶性,具有很高热稳定性;在400nm处有特异的吸收峰,pH值影响其最大的吸收波长;紫外线照射下发荧光,与铁离子结合荧光萃灭,而400nm处的吸收峰仍存在;分离纯化的铁载体与Pseudomonas sp.SPF-1一样能在通用CAS检测平板上形成铁载体晕圈;通过琼脂糖电泳与薄层色谱发现Pseudomonas sp.SPF-1分泌3种荧光铁载体,且极性差异较大;波长扫描发现其与荧光素在光谱吸收(490nm)、运输铁离子方面存在本质区别。研究结果说明我们建立的MSA-CAS检测方法是一种高灵敏的、特别适于荧光铁载体检测的方法;发现荧光与非荧光铁载体在铁离子应答差异,且前者较后者灵敏的现象,这对更深入地探讨假单胞菌铁载体合成与调控机制提供依据。……   
[关键词]:铁载体;假单胞菌;铁离子;光谱吸收;CAS检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:武汉大学2005年