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大蒜拮抗内毒素作用的物质基础及生物学活性研究

蒋栋能

  目的:内毒素(LPS)是G~-细菌外膜的主要成分,是引起脓毒症的主要病原分子。LPS通过其活性中心Lipid A与细胞表面的受体结合,介导脓毒症的发生。因此,阻断Lipid A与其受体的结合是防治脓毒症的关键之一。大量的实践证明:某些药食两用植物具有拮抗脓毒症的功效,而且来源广泛、培植周期短、加工简便,有良好的应用前景。本课题以Lipid A为靶点,应用生物传感器技术平台,在药食两用植物中定向分离具有拮抗脓毒症作用的活性物质并对其生物学活性进行评价。方法:(1)应用生物传感器技术,对大蒜、苦瓜、鱼腥草、生姜、芫荽等5种药食两用植物进行与Lipid A结合活性的筛选。(2)利用生物传感器、硅胶柱层析、离子交换—HPLC等技术,对筛选出的药食两用植物中与Lipid A具有结合活性的组分进行定向分离。(3)在体外,观察活性组分与Lipid A结合的亲合力及对LPS刺激小鼠RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用。(4)在小鼠体内,观察活性组分对LPS的中和作用及对LPS血症模型小鼠炎症介质释放的抑制作用,并观察其对LPS及热灭活细菌攻击小鼠的保护作用。(5)应用反相-HPLC技术对活性组分进行成分分析,并对主要的活性物质进行定向分离;对所得到的单体化合物进行NMR及MS等结构测定;在体外观察其对LPS的中和作用及对LPS刺激的RAW264.7细胞分泌炎症介质的抑制作用,以评价其生物学活性。结果:(1)在所筛选的5种药食两用植物中,大蒜与Lipid A结合的活性最高。(2)从大蒜中定向分离出4个与Lipid A具有结合活性的组分,其中以A组分(ASLA)的结合活性最高,并对LPS攻击小鼠具有保护作用。(3)体外实验显示,ASLA与Lipid A具有较高的亲合力;对LPS刺激的RAW264.7细胞分泌炎症介质具有显著的抑制作用,并呈现良好的量-效关系和时-效关系。(4)在体研究显示,ASLA在小鼠体内对LPS具有显著的中和能力;对LPS血症模型小鼠血中的炎症介质释放具有显著的抑制作用;对LPS和热灭活的G~-细菌和G~+细菌攻击的小鼠均具有显著的保护作用,并呈现良好的量-效关系。(5)对ASLA的成分分析显示,ASLA主要由2个单体物质组成;我们成功地定向分离出这2个单体物质(ASLA1#、ASLA 2#),其纯度均>99%;结构测定的质谱显示,ASLA1#和ASLA2#的基峰均是176,ASLA1#在245和267还有两个峰,……   
[关键词]:大蒜;生物传感器;内毒素;Lipid A;脓毒症
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第三军医大学2005年