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Bt-CpTi抗虫基因对玉米的遗传转化

闵丽

  本研究以5 个东北主栽玉米自交系品种和2 个单交种的胚叶和幼胚为外植体诱导愈伤组织,探讨了影响植株再生及农杆菌介导法和电击法遗传转化效率的主要影响因素,建立了高效的玉米再生体系和稳定的遗传转化体系,获得了1 株PCR 检测阳性植株,初步证实Bt-CpTI双价抗虫基因已经整合到玉米基因组中。主要研究结果如下: 1.再生体系的建立⑴玉米胚性愈伤的产生受遗传因素的影响,不同基因型胚性愈伤诱导率差异很大。玉米胚叶愈伤组织的形成能力因其形态学部位的不同而呈显著差异,从基部向上依次递减。在供试的玉米基因型中,胚叶胚性愈伤诱导率以吉846、81162 较高,同时确定了切取玉米胚叶的最佳部位是从胚叶基部向上切取0.3cm 左右的小段诱导愈伤。而幼胚胚性愈伤诱导率以DH11、DH9、吉846、81162 较高。⑵不同基因型玉米诱导愈伤组织所需的最佳2,4-D浓度不同,对玉米胚叶诱导愈伤的分别是81162为2mg/L,吉846、农大178、K10为3mg/L,东8112为4mg/L。对玉米幼胚诱导愈伤的分别是K10为4mg/L,农大178、东8112、吉846、81162为3mg/L。⑶玉米不同基因型的不定芽分化率不同。愈伤组织分化培养基确定为:MB + 6-BA 1.0mg/L + KT 0.5mg/L。⑷再生芽生根培养基确定为:MB + IBA 2.0mg/L + NAA 0.5mg/L。并通过不断地改进玉米移栽培养条件,提高了再生苗的移栽成活率。2.遗传转化体系的建立⑴选择剂Geneticin(G418)浓度的确定确定了农杆菌遗传转化的抗性筛选剂为G418,筛选剂G418 的使用浓度在愈伤组织生长阶段为60mg/L,分化阶段为40mg/L。⑵农杆菌介导法对玉米胚性愈伤组织的遗传转化①愈伤组织的基因型不同,转化效果不同,通过检测GUS 瞬时表达率,确定了DH11、DH9、吉846 都是理想的转化受体材料。②探讨了影响遗传转化效率的4 个因素正交试验的较优组合为:预培养6d、侵染时间10min、共培养时间3d、共培养培养基葡萄糖浓度10g/L。4 个因素的影响程度依次为:共培养时间、侵染及共培养基中加葡萄糖浓度、侵染时间、预培养时间。⑶电击法对玉米胚性愈伤组织的遗传转化探讨了电击法电击参数对愈伤组织的伤害情况,确定了电击参数。电容为960μF,电场强度为375v/cm,电击时间为61ms 为合适的电击条件。3.转化体的PCR 检测……   
[关键词]:玉米;Bt-CpTI 抗虫基因;农杆菌介导法;电击法
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:东北农业大学2005年