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肌肽对DNA氧化损伤的作用及其机制的研究

黄进

  DNA是生命的遗传物质,DNA的损伤引发多种疾病。因此寻求有效的、天然的保护DNA的药物具有重要的理论价值和实际意义。肌肽是由L-组氨酸和β-丙氨酸组成的二肽,是一种存在于动物体内的具有多种功效的天然抗氧化剂。本论文采用TBA法,化学发光法测定了肌肽在四种不同体系中对DNA氧化损伤的作用。这四种体系为:1、phen-Cu~(2+)-VitC体系,2、BLMA_5-Fe~(2+)体系,3、VitC-Fe~(2+)体系,4、phen-Cu~(2+)-VitC-H_2O_2体系。设常用抗氧化剂甘露醇、苯甲酸钠、二甲基亚砜做对照,比较了它们抗氧化能力的强弱,并检测了肌肽的组成成分L-组氨酸、β-丙氨酸、咪唑在这四种不同体系中对DNA损伤的作用,绘制了抑制动力学曲线,希望通过这几种物质抗氧化行为动力学曲线的比较,找出肌肽对DNA氧化损伤作用的保护机制。体系Ⅰ利用phen-Cu~(2+)-VitC体系产生OH,对DNA造成损伤,采用TBA法测定了加入5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L四种浓度的肌肽后体系512nm光吸收值。结果表明肌肽对由phen-Cu~(2+)-VitC体系引起的DNA损伤有明显的抑制作用(P<0.05),且随着肌肽浓度的增大,对DNA损伤的抑制作用增强。20mmol/L时,与β-丙氨酸、甘露醇、苯甲酸钠、二甲基亚砜相比,肌肽的抗氧化活性显著高与甘露醇等抗氧化剂(p<0.05);与L-组氨酸相比没有显著差异且肌肽的抗氧化动力学曲线与L-组氨酸相似。在phen-Cu~(2+)-VitC体系中肌肽等物质对脱氧核糖的损伤没有显著的差异(P>0.05)。体系Ⅱ用BLMA_5-Fe~(2+)体系对DNA造成损伤,用TBA法检测了加入肌肽、甘露醇等抗氧化剂后DNA在该体系中损伤程度的变化。结果表明,肌肽、L-组氨酸浓度小于8mmol/L时对DNA损伤具有明显的促氧化作用,浓度大于此浓度时对DNA损伤的抑制率显著增高,抗氧化活性大于甘露醇等常用抗氧化剂(p<0.05)。肌肽的抗氧化动力学曲线与L-组氨酸相似。在本实验过程中我们还观察到博莱霉素对脱氧核糖不切割(OD_(532)值0.056)。体系Ⅲ以VitC-Fe~(2+)系统产生过氧化氢和羟自由基对DNA造成氧化损伤产生MDA物质为基础,采用TBA法在脱氧核糖水平上检测肌肽对DNA氧化损伤的作用。设咪唑,L-组氨酸,β-丙氨酸,甘露醇,苯甲酸钠,二甲基亚砜为对照,对它们抗氧化能力的强弱做了比较,并对其抗氧化机理做了初步探讨,结果发现在本实验条件下肌肽对DNA损伤有明显的抑制作用(p<0.01),且随着肌肽浓度的增大抗DNA损伤的能力增强。10mmol/L时肌肽在VitC-Fe~(2+)系统中对DNA损伤的抑制率为78.38%,而苯甲酸钠为1.88%,甘露醇为18.98%,肌肽的抗氧化能力明显优于苯甲酸钠等常用抗氧化剂(p<0.01)。其抗氧化动力学曲线与咪唑相似,提示其抗氧化机理与咪唑环有关。在该体系中苯甲酸钠浓度较低时对DNA和脱氧核糖都有轻微的促氧化作用。肌肽、、咪唑、甘露醇、L-组氨酸、β-丙氨酸对脱氧核糖损伤有显著的保护作用(p<0.01)体系Ⅳ采用化学发光法检测了在Phen-Cu~(2+)-VitC-H_2O_2-DNA系统中加入肌肽、L-组氨酸、……   
[关键词]:肌肽;自由基;DNA氧化损伤;抗氧化剂
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河南农业大学2005年