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猪瘟病毒E2基因的克隆及其DNA疫苗免疫效果的研究

涂亦娴

  猪瘟(CSF or HC) 是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV or Hog Cholera Virus, HCV) 引起的一种猪的高度接触性烈性传染病,死亡率极高,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。猪瘟已被国际兽疫局(OIE) 列为家畜A类传染病,我国也将其列为一类动物疫病。60 年代我国研制的猪瘟兔化弱毒疫苗在猪瘟病毒防治中起了决定性作用,有效的控制了猪瘟在我国大规模的流行。但是,猪瘟在我国各地仍有散发和流行,因此,研制一种新型猪瘟疫苗是十分必要的。本研究首先构建猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2 基因的核酸疫苗,并对其体外表达效率和体内免疫效果进行检测;同时还对核酸疫苗和蛋白质疫苗联合免疫增强CSFV proVAX-E2n 核酸疫苗免疫效果进行了研究。用RT-PCR 方法从猪瘟活疫苗(Ⅱ)(弱毒疫苗)中扩增获得了E2 基因片段, 并将其克隆到pMD18-T 载体上,经测序和GENEBANK 分析,该核苷酸序列是E2基因的核心序列,与Shimen 株的同源性为93.4%; 然后将该序列克隆到真核表达载体pVP22 和proVAX 上,经体外酶切鉴定正确后,用重组质粒pVP22-E2n 和proVAX-E2n 转染Hela 细胞,通过RT-PCR 和ELISA 的方法确认重组质粒能在真核细胞中表达;再用100μg pVP22-E2n 和proVAX-E2n 分别与1% 左旋咪唑混合免疫接种昆明白小鼠,对照组注射空质粒pVP22 和proVAX;以比较pVP22-E2n和proVAX-E2n 两种核酸疫苗的体外表达效率和体内免疫效果。结果显示这两种重组质粒均能够在真核细胞中表达,且proVAX-E2n 体外表达效率和小鼠免疫效果均高与pVP22-E2n 真核表达质粒。核酸疫苗技术是20 世纪90 年代发展起来的一种新型疫苗免疫技术,它具有能同时诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答,安全性高,成本低廉,贮运方便等诸多优点,在多种感染性疾病的防治中已显示出其他形式疫苗无法比拟的优势。为了进一步提高核酸疫苗的免疫效果,人们通过各种途径来增强……   
[关键词]:猪瘟病毒E2 基因;核酸疫苗;DNA prime -protein boost;真核表达载体;T 淋巴细胞增殖
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆大学2005年