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山东省畜禽源性魏氏梭菌毒素型Multi-PCR调查

王磊

  为搞清楚山东省魏氏梭菌毒素型真实分布情况,建立了Multi—PCR检测方法,对近5年内本省流行过该病的德州、泰安、枣庄、青岛、临沂、烟台等地的24个养殖场采集的692个样品进行了检测,共分离到124株魏氏梭菌,检出率为17.9%:经Multi—PCR检测均为A犁。检测结果确实可靠,为准确的预防该菌感染提供了理论指导。同时本课题还建立了魏氏梭菌的快速PCR鉴定方法,具有较高应用价值。本研究共分四部分:第一部分:魏氏梭菌的分离和初步鉴定 将采集的粪便样品分别无菌称取5g稀释到50ml营养肉汤中,置于厌氧培养箱中43℃增菌18h,然后取出按“三线分离法”接种到血培养基上,43℃厌氧培养12h,可见圆形、突起、边缘整齐、表面湿润、光滑、双溶血环微绿的菌落。然后将菌落涂片,染色,镜检,同时对照在有氧环境中培养无菌落生长。镜检为典型革兰氏阳性的两端钝圆、粗大杆菌通过API-20A生化鉴定系统、牛乳暴烈发酵实验进行鉴定。共分离鉴定124株魏氏梭菌。第二部分:魏氏梭菌的PCR快速诊断方法的建立及应用 建立了聚合酶链氏反应魏氏梭菌α毒素基因的检测方法,通过不断摸索条件优化了试剂使用剂量,缩短了反应时间,另外用该法对沙门氏菌、大肠杆菌、肠球菌和葡萄球菌扩增。结果表明,仅魏氏梭菌扩增出了特异性条带,最低能检测到1CFU,说明该方法具有很高的特异性和敏感性。用该法对山东齐河两个猪场、一个牛场、一个羊场和,一个兔场进行了样品检测,共检测到11株牛源(11/60),检出率为18.3%;4株猪源魏氏梭菌(4/20),检出率为20%;3株羊源魏氏梭菌(3/10),检出率为30%;3株兔源魏氏梭菌(3/12),检出率为25%,其PCR总检出率为20.6%,与常规细菌分离鉴定结果一致。应用显示本方法是魏氏梭菌的一种快速、简便的鉴定方法,具有很高的推广应用价值。第三部分:魏氏梭菌Multi-PCR检测方法建立及在空气样品检测上的应用 根据GenBank上发表的序列设计了四对引物,通过不断优化反……   
[关键词]:魏氏梭菌;毒素型;Multi-PCR;流行病学
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:山东农业大学2005年