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从纤维单胞菌中分离纯化聚阿拉伯糖内切酶

张晓影

  聚阿拉伯半乳糖(Arabinogalactan,AG)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分,其分子是由聚阿拉伯糖和聚半乳糖组成。目前对于 AG 聚糖结构的了解并不完全,这主要是由于 AG 是一个具有分枝结构的大分子,采用传统的化学分析方法很难确切地揭示 AG 的分子结构。因此,采用专一的内切酶将 AG 大分子降解成合适的片段,再结合常规的化学分析方法确定其分子结构,是一条较为理想的结构分析方法。施行此方法的前提条件是首先要取得合适的聚糖内切酶。1994 年,美国克罗拉多州立大学的微生物系分枝杆菌研究室从土壤中筛选出一种纤维单胞菌属的细菌[1-3],该细菌的液体培养液中含有多种功能相近的水解酶,能够将 AG 降解成一系列的寡糖片段。毫无疑问,这种来自于土壤的微生物为聚糖结构分析提供了一系列水解工具酶。本课题选取能将 AG 水解成六聚阿拉伯糖片段的内切酶作为研究对象,希望获得纯化的工具酶。鉴于目前还没有关于聚阿拉伯糖内切酶基因或蛋白质的任何报道,所以对于酶蛋白进行分离纯化成为获取目标蛋白质结构信息的唯一途径。本论文从建立 AG 水解酶的活性检测入手,尝试了一系列的分离纯化方法,比较了各种层析手段对粗酶的分离结果,从中选取三种有效的层析方法,并建立了最优组合方案,对 AG 水解酶进行初步纯化,获得了以下结果。1.选取薄板层析(thin layer chromatography, TLC)作为酶解产物……   
[关键词]:聚阿拉伯半乳糖;六聚阿拉伯糖;聚阿拉伯糖内切酶
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:大连医科大学2005年