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SARS-CoV主要结构蛋白的基因表达及DNA疫苗构建

李建娜

  严重急性呼吸道综合症(severe acute respiratory sydrome, SARS)的病原体为SARS冠状病毒,SARS-CoV中参与病毒组装和细胞侵染过程的物质主要为4种结构蛋白(S、M、N、E),这些蛋白是决定SARS-CoV独特的生物学行为的物质基础,正确表达这四种结构蛋白对于SARS的诊断,试剂开发和疫苗的构建有着深远的意义。本课题研究的目的是用大肠杆菌表达的SARS冠状病毒的主要结构蛋白S、M、N、E作为抗原检测SARS-CoV抗体的可行性,及其这4个结构蛋白基因构建的DNA疫苗诱发小鼠产生抗SARS-CoV的IgG水平。研究方法:首先克隆了SARS-CoV主要结构蛋白(S、M、N、E)的编码基因,以pET-15b、pET-22b、pQE-2为载体,并分别在原核系统中表达,表达的蛋白均以可溶的形式存在,根据融合蛋白的性质采用亲和层析的方法获得纯化的重组蛋白M15b、M22b、rN、rS1、rS2、E15b。同时将这四个主要蛋白的编码基因克隆入真核表达载体pSecTagB,构建DNA疫苗,免疫小鼠后获得抗血清,并进行了一系列的ELISA检测。结果发现以重组蛋白作为抗原进行ELISA检测能与免疫了DNA疫苗的小鼠血清以及SARS病人恢复期血清均可发生特异性的抗原抗体反应;另外,用SARS全病毒作为抗原(华大公司SARS检测试剂盒)也可以和免疫鼠血清发生抗原抗体特异性反应。重组蛋白可以在大肠杆菌中得到高效表达,并可作为SARS检测的抗原。构建的DNA疫苗可以在小鼠体内产生抗SARS的特异性抗体,为SARS-CoV DNA疫苗的开发提供借鉴作用。……   
[关键词]:SARS冠状病毒;蛋白表达;DNA疫苗
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华南热带农业大学2005年