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质膜完整性在中华绒螯蟹(Eriocheir Sinensis)精子质量评价研究中的应用

马强

  一、两种获得中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)游离精子方法的比较研究在pH 7. 4的条件下,采用不同的温度、酶浓度和作用时间进行了正交实验研究了胰蛋白酶消化中华绒螯蟹精荚获得游离精子的最佳反应条件。以每克精荚获得的精子数量为判据,发现酶作用时间是主要的影响因子,其次是温度和酶浓度。酶消化的最适反应条件是:温度为37℃,酶浓度为0. 20%,作用时间为5 min。酶消化法与机械匀浆法的比较研究发现,酶消化法从每克精荚中获得的精子量为7. 41×108个,显著高于匀浆法;且精子的死亡率为4. 75%,显著低于匀浆法。此外,用人工诱导顶体反应法进一步检测酶消化法以及机械匀浆法所获得精子的顶体反应能力,发现酶消化法获得精予的顶体反应率为62. 3%,而匀浆法为64. 5%,两者无显著性差异。因此,酶消化获得游离精予的方法明显优于机械匀浆法。二、两种检测中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)精子活力方法的研究本文采用台盼兰和伊红染色法对中华绒螯蟹精子活力进行了评价研究。结果表明两种染色法中死、活精子分别呈现出明显不同的染色特征:活精子无色透明,顶体中央凸起呈圆锥状,光学显微镜下可见到核杯发出的辐射臂,细胞边界清晰可辨;而死亡精子项体着色且中央有一染色较深圆斑,核杯染色不明显,细胞体积变大,辐射臂消失,边界不明显。而两种染色法最适染液浓度和时间是0. 25%的伊红和0. 5%的台盼兰染色15min。然后对两种染色方法的相关性进行了分析。将新鲜精子和处理致死精子以不同的体积混合,配成含有死精子比例为10%-90%的9个浓度梯度,将其视为该样本死精子含量的理论值;用两种染色法检测这些精子样品的死亡率。结果显示:台盼兰法和伊红法测得的结果与理论值显著正相关(P<0. 05) ,而且他们二者之间亦显著正相关(P<0. 05) 。说明这两种染色法均可用于精子活力检测中,其结果具有可比性。三、荧光分光光度计分析中华绒螯蟹精子质膜的完整性……   
[关键词]:中华绒螯蟹;精子获得;胰蛋白酶;消化法;机械匀浆法;台盼兰;伊红;质膜完整性;流式细胞仪;精子活力
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华东师范大学2005年