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转基因抗草甘膦大豆参比分子的构建

董流昕

  转基因作物已经被广泛种植,但转基因产品的安全性尚无科学定论,因而各国根据自己的安全准则制定了转基因产品的标识政策。目前,已有40多个国家和地区出台了转基因产品管理法规,而美国、加拿大和中国的香港地区采取自愿标识的政策。但为了建立基因标识制度,必须建立一个有效分析方法。近年来,实时荧光PCR已经成为国际上转基因产品定性(量)检测的通用方法,由于参照物质制备过程中存在多种限制因素,本研究尝试以质粒替代参照物质作为转基因大豆定量检测中的参照分子。本文用实时荧光PCR对抗草甘膦大豆进行定量检测并且构建定量用的标准质粒分子,该质粒包含35s边界序列、CTP、EPSPS、Nos、NOS边界序列及Lectin。该质粒分子稀释成250000、25000、2500、250和25个拷贝,对CP4-EPSPS和Lectin分别设计探针和引物,通过实时荧光PCR用质粒分子对单粒转基因种子进行内外基因拷贝数进行定量,确定两条探针对质粒和种子的核酸之间的扩增效率差异,即为C_f值,用0%、0.5%、1%、2%的抗草甘膦大豆的核酸C_f值进行验证性实验,从而确定定量准确度。……   
[关键词]:实时荧光PCR;抗草甘膦大豆;质粒;C_f值
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:北京林业大学2005年