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巴西蘑菇多糖(ABPS)诱导K562肿瘤细胞凋亡的分子机理研究

袁丽铭

  目的研究巴西蘑菇多糖诱导肿瘤细胞凋亡的作用机制,并进一步研究P53、Caspase.3和P16等3个基因在此凋亡过程中的作用。方法四氮唑蓝比色法(MTT法)及集落形成法观察ABPS对K562肿瘤细胞生长抑制以及细胞增殖的影响;应用流式细胞仪、透射电镜、荧光显微镜及DNA凝胶电泳仪等仪器设备检测ABPS诱导K562肿瘤细胞凋亡的发生;并用逆转录一聚合酶链反应(RT—PCR)法检测与此次凋亡相关的基因Caspase-3、P53和P16的表达;并同时与美国泛华药业公司成功分离的具有诱导K562肿瘤细胞凋亡作用的多糖成分进行横向比较,纵横结合阐明本研究分离得到的ABPS的抗肿瘤效果。结果1巴西蘑菇多糖诱导K562肿瘤细胞发生凋亡,荧光显微镜和电镜下均观察到K562肿瘤细胞呈现典型的凋亡细胞的形态变化:细胞核固缩,核内染色质浓缩、凝聚,形成新月形或环状结构紧靠在细胞核核膜边沿,并形成凋亡小体;流式细胞仪可检测到ABPS1 mg/ml诱导K562肿瘤细胞72h时的明显的亚二倍体峰;2巴西蘑菇多糖对K562肿瘤细胞的生长和增殖有明显的抑制作用,与对照组相比有显著性差异(p<0.01),且抑制率与用药剂量及时间呈显著性正相关(r=0.875),在剂量为0~1mg/ml范围内,抑制率随剂量的增加而增加,当剂量超过10mg/ml/d时,抑制率反而下降;3巴西蘑菇多糖可增强P53、Caspase-3和P16等3个基因的表达活性,引起DNA降解损伤,反向调节细胞周期活动,促使细胞从GO期进入G1期,抑制肿瘤细胞的生长。结论巴西蘑菇多糖通过上调Caspase-3、P53、P16等基因的表达,抑制K562肿瘤细胞的生长和增殖,诱导其发生凋亡。……   
[关键词]:巴西蘑菇多糖;K562肿瘤细胞;凋亡;基因
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:上海师范大学2005年