手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

植物乳杆菌转化亚油酸生成共轭亚油酸的研究

张中义

  共轭亚油酸(CLA)有很好的抗癌、减肥、抗动脉硬化等生理活性。目前,CLA工业化生产是由化学异构法制得,其产物中异构体组成复杂,不利于在食品和医药方面使用。亚油酸生物异构化生成CLA,产物中异构体组成单一,乳酸菌异构化亚油酸生成CLA有很好的应用前景。本课题对Lactobacillus plantarum转化亚油酸生成CLA过程进行了研究,内容包括菌种分离、筛选、鉴定,菌种诱变选育,CLA发酵过程动力学,洗涤细胞转化亚油酸生成CLA,亚油酸异构酶分离纯化,酶学性质研究和提高发酵牛乳CLA含量实验研究。论文主要内容如下:1) 从酸菜中分离出一株较高CLA产量的乳酸菌L_(29),鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillusplanmrum置信度96.1%)。2) 以L.plantarum L_(29)为出发菌株,通过紫外线照射和硫酸二乙酯(DES)诱变处理,选育出突变株L.plantarum LT2-6,CLA产量提高18.6%。3) 对L.planmrum LT2-6在5 L罐规模的分批发酵过程进行了实验分析研究,获得了分批发酵过程动力学曲线,建立了分批发酵过程菌体生长、产物CLA生成和底物(葡萄糖)代谢数学模型。4) Lplanmrum LT2-6洗涤细胞转化亚油酸生成CLA优化条件为:30℃,pH 7.0,亚油酸浓度1.5%(w/v),细胞浓度20%(w/v)。反应64 h,CLA产量达到最大(7.86g/L),亚油酸转化率为52.4%。经脂肪酸萃取和甲酯化,气相色谱检测显示,土要产物为cis-,trans-9,11.CLA。5) L.plantarum LT2-6亚油酸异构酶分子量约为48.8 KDa,最适pH 6.0,最适温度30℃,不耐热,温度高于50℃时,稳定性下降很快。金属离子对此酶活力影响顺序为:Mg~(2+)>Ca~(2+)>Mn~(2+)>Fe~(2+)>Zn~(2+)>Na~+。酶动力学参数为:K_m=12.46 μmol/L,V_m=1.933×10~(-1)/μmol/h.mg。6) 以L.plantarum LT2-6为牛乳发酵剂,转化亚油酸生成CLA的适宜温度为37℃。牛乳中添加葡萄糖和小分子氮源,可促进Lplantarum LT2-6生长和提高CLA产量。牛乳中亚油酸添加量超过0.075%时,对菌体生长和CLA生成均产生抑制。菌体生长对数期末尾和稳定期,CLA生成活跃。发酵24 h,CLA产量最大,生成的产物主要为cis-,trans-9,11-CLA。牛乳中加入0.075%的亚油酸,37℃,发酵24 h,亚油酸转化率为50%。脱脂牛乳添加亚油酸经L.plantarum LT2-6发酵后,CLA含量比普通酸乳提高5~6倍。……   
[关键词]:乳酸菌;植物乳杆菌;生物转化;亚油酸;共轭亚油酸
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国农业大学2005年