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高温碱性蛋白酶产生菌株SD-142的分离、鉴定及发酵产物性质的初步研究

舒丹

  对西藏拉孜县锡钦乡堆肥及温泉、西藏当雄温泉、西藏八宿吉达温泉及西藏尼木卡如林温泉等地采集到的数十份土样进行细菌分离,筛选到381株能在55℃条件下生长的菌株,点种于酪蛋白底物平板上进行初筛,从中筛选出37株能产高温碱性蛋白酶的菌株,在50℃下进行摇瓶复筛。最后得到一株传代性质稳定、耐盐碱、高酶活的菌株SD-142。经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.)。芽孢杆菌SD-142革兰氏染色反应为阳性,菌体呈短杆状,大小为0.3~0.5μm×0.6~1.0μm,成链排列。芽孢椭圆形、端生,芽孢囊膨大。生长温度范围为25~62℃,生长pH范围为5.0~11.0,最适生长pH为6.0~8.0。可在14%NaCl的培养基中生长。该菌株可利用葡萄糖产酸、产气,也能利用乳糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、山梨糖、甘露糖、鼠李糖、果糖和木糖等产酸。该菌可水解淀粉、酪素,不能分解酪氨酸。硝酸盐还原阳性,M.R阳性、V.P阳性,V.P培养物pH为5.0。利用柠檬酸盐,不利用丙酸盐。石蕊牛奶产酸。菌株SD一142的适宜种子培养基为麦芽糖2%、蛋白膝0.5%、KHZPO;0.1%、MgSO;0.05%,pH7.O。发酵培养基为葡萄糖6%、豆饼粉3%、数皮3%、NaZHPo;0.40;0、Mgso4 0.02%、eae一:0.02%,pH自然。在上述种子培养基中40℃、180印m培养12h后,按10%接种量接种于上述发酵培养基中45℃发酵48h,取上清液测定酶活。在最适发酵条件下,菌株SD一142发酵液中蛋白酶活力稳定保持在650川mL左右。 菌株SD一142分泌的高温碱性蛋白酶最适反应温度60℃,最适酶作用pHg.5。粗酶液在40℃水浴中保温24h,酶活没有改变;60℃水浴保温30min,酶活保持50%;若在glycine存在下60℃水浴保温lh后剩余酶活58.3%,延长了酶的半衰期。在pH 6.5一11 .0范围内SD一142高温碱性蛋白酶酶活性保持稳定。 菌株SD一142高温碱性蛋白酶粗酶液0.1 mL与1%SDS等体积混合40℃温育10min,剩余54.4%酶活;与不同市售洗衣粉(14mg/mL)等体积混合,40℃温育lh后酶活力仅有较小损失,体现了其较高稳定性及与去污剂很好的相容性,表明SD一142分泌的高温碱性蛋白酶在洗涤业中可能有应用潜力。同时,实验证明该菌株能耐盐、碱,所产生的高温碱性蛋白酶具有较稳定的酶活性和较好的脱毛效果,控制好条件不会产生烂皮现象,显示了其适用于皮革工业的性能与前景。’关键词:芽抱杆菌;高温碱性蛋白酶;发酵条件;酶性质;去污剂;脱毛……   
[关键词]:芽孢杆菌;高温碱性蛋白酶;发酵条件;酶性质;去污剂;脱毛
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川大学2004年