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大菱鲆病原菌的鉴定及哈维氏弧菌溶血素的克隆

颜显辉

  从病大菱鲆中分离到九株菌VA-1、VA-2、VA-3、VH-1、VI-1、ET-1、EN-1、MA-1和PA-1。经形态及生理生化鉴定,VA-1、VA-2、VA-3为鳗弧菌,VH-1为哈维氏弧菌,VI-1为肠弧菌,ET-1为迟缓爱德华氏菌,EN-1属于肠球菌属,MA-1属于海单胞菌属,PA-1属于交替单胞菌属。对九株菌的16SrDNA序列进行了扩增、克隆、测序和序列分析。序列分析结果显示,VA-1、VA-2、VA-3和鳗弧菌01和02a血清型亲缘关系最近;VH-1和哈维氏弧菌的亲缘关系最近;VI-1和肠弧菌的亲缘关系最近;ET-1和迟缓爱德华氏菌的亲缘关系最近;EN-1与肠球菌亲缘关系最近;PA-1与假交替单胞菌亲缘关系最近;而MA-1与海单胞菌亲缘关系较远。综合考虑形态及生理生化特征和16SrDNA序列分析结果,可以判定VA-1、VA-2、VA-3为鳗弧菌,VH-1为哈维氏弧菌,VI-1为肠弧菌,ET-1为迟缓爱德华氏菌,EN-1属于肠球菌属,PA-1属于假交替单胞菌属,而MA-1还需进一步鉴定。腹腔注射感染实验表明,VA-1、VA-2、VA-3和ET-1对大菱鲆都有很强的致病性;VH-1和EN-1致病力较弱;VI-1对大菱鲆没有致病性,但对牙鲆有较强的致病性。PA-1和MA-1不造成大菱鲆死亡,无致病性。测试了菌株对28种抗生素的敏感性,结果发现菌株VA-1对16种抗生素有抗性,对5种抗生素中度敏感,对7种抗生素敏感。菌株VA-2对14种抗生素有抗性,对8种抗生素中度敏感,对6种抗生素敏感。菌株VA-3对12种抗生素有抗性,对7种抗生素中度敏感,对9种抗生素敏感。菌株VH-1对25种抗生素有抗性,对2种抗生素中度敏感,对1种抗生素敏感。菌株VI-1对12种抗生素有抗性,对3种抗生素中度敏感,对13种抗生素敏感。菌株ET-1对12种抗生素有抗性,对7种抗生素中度敏感,对9种抗生素敏感。菌株EN-1对22种抗生素有抗性,对4种抗生素中度敏感,对2种抗生素敏感。菌株MA-1对20种抗生素有抗性,对4种抗生素中度敏感,对4种抗生素敏感。菌株PA-1对中国海洋大学硕士研究生毕业论文27种抗生素有抗性,对1种抗生素中度敏感。应用PCR扩增,从哈维氏弧菌VH一1染色体DNA扩出哈维氏弧菌溶血素基因片断,DNA序列分析表明:克隆的片断由1257个碱基组成,含有完整的溶血素基因阅读框。其核昔酸序列与哈维氏弧菌viB 645的两种溶血素vhhA和vhhB的同源性分别为99.7%和98.4%;与副溶血弧菌、霍氏弧菌、鳗弧菌、霍乱弧菌、河流弧菌、最小弧菌、创伤弧菌溶血素的相似性分别为74.6%、24.6%、20.1%、22.5%、20.8%、20.5%、21.7%。……   
[关键词]:大菱鲆;病原菌;鉴定;16SrDNA;哈维氏弧菌;溶血素
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国海洋大学2004年