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低氧和去铁胺习服对高原肺水肿大鼠的影响及HIF-1表达的研究

李福祥

  目的:低氧诱导因子-1(HIF-1)是近年发现的一种DNA结合蛋白,系介导哺乳动物细胞适应低氧环境的核转录因子,调控的基因达40余种,这些基因的主要功能概括起来包括糖代谢、氧的运输、细胞的生长与凋亡等。目前关于肺组织的低氧习服研究甚少,而HIF-1在肺低氧习服机制中的作用尚未见报道。本实验旨在探讨低氧习服对实验性HAPE的影响及肺组织HIF-1在低氧习服中的作用机制,HIF-1 α稳定剂DFX习服对实验性HAPE的影响,以了解药物代替低氧习服的可行性。方法:低压舱模拟海拔6000m急性缺氧24h制备大鼠HAPE的动物模型。Wistar大鼠随机分成对照组(N)、急性低氧对照组(H_0),急性低氧组(H_1)、3000m低氧习服对照组(C_(3.0))、3000m低氧习服组(C_(3.1))、5000m低氧习服对照组(C_(5.0))、5000m低氧习服组(C_(5.1)),每组8只;完成相应处理后,用RT-PCR和蛋白免疫印迹法分别测定肺组织HIF-1 α mRNA及蛋白表达及光镜及透射电镜观察各急性低氧组肺病理变化。DFX对大鼠肺组织HIF-1 α表达影响:Wistar大鼠随机分成5组,每组大鼠5只,腹腔注射DFX200mg/kg后,分别用RT-PCR法和免疫组化方法动态检测肺组织HIF-1 α mRNA及蛋白表达的变化。DFX习服对HAPE影响:Wistar大鼠随机分成正常对照组(N)、急性低氧对照组(H_0)、急性低氧组(H_1)、DFX习服对照组(DFX_0)、DFX习服(DFX_1)5组,每组8只。完成相应处理后,用光镜及透射电镜观察肺病理改变,用RT-PCR法检测肺组织HIF-1 α mRNA表达的变化,用比色法测定肺组织NO含量及Na~+-K~+ATP酶活性。结果:1、大鼠在模拟海拔6000m急性缺氧24h后经光镜及透射电镜观察发现肺第三军医大学硕士学位论文组织出现典型的肺间质性水肿,经低氧习服或DFX习服后则肺水肿程度减轻。2、大鼠经过3000m和5O00m低氧习服后,随着习服程度的加深,H工F--1QmRNA表达水平明显升高。但蛋白免疫印迹法未检测到肺组织HIF一IQ蛋白的表达。3、DFXZOOmg/kg腹腔注射Zh后大鼠肺组织HIF一1 a mRNA表达量开始增加,4h后到底到达峰值,随后逐渐下降,24h后恢复正常。DFX习服后HIF一1aml又NA表达显著增加。4、未经川了X习服急性低城组人鼠肺组织NO含量显著下降,DFX习服组大鼠)J,l,组织NO含量则明显回升,但仍低于正常对照组。5、未经DFX习服急性低氧组大鼠肺组织Na十一K十ATP酶活性显著下降,DFX习服组大鼠肺组织Na+一K+ATP酶活性则明显回升,并显著高于正常对照组。结论:1、模拟高原低压低氧环境可制备稳定的高原肺水肿大鼠模型,主要病理改变为间质性肺水肿。2、低氧习服可以减轻大鼠HAPE的严重程度,增加大鼠肺组织fllF一lamRNA表达,表明肺组织也存在低氧习服情况,HIF一IQ参与肺组织低氧习服的调控过程,低氧习服对大鼠HAPE具有保护作用;本实验条件下,证实有HIF~1 Oml州A表达变化,而未检测到HIF一la蛋白在肺组织表达,原因尚待确定。3、DFX习服与低氧习服作用相似,能减轻HAPE大鼠的肺水肿程度,增加 HIF一1 0 mRNA表达。DFX习服有可能代替低氧习服。4、低氧习服和DFX习服过程中,HIF一lmRNA表达均有相应改变,可能参与NO含量及Na十一K十ATP酶活性的调节,在高原肺水肿发病中起重要作用。……   
[关键词]:高原肺水肿;低氧习服;去铁铵;低氧诱导因子-1;一氧化氮;钠-钾ATP酶;大鼠;间质性肺水肿
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:第三军医大学2004年