手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

有机锡致疣荔枝螺性畸变的分子机制研究

周小朋

  本文主要探讨有机锡污染致海洋软体动物出现异常形态特征——性畸变的分子机制,选取了受有机锡污染后高频率出现性畸变的疣荔枝螺为实验材料,从性别形态特征、蛋白质、DNA以及RNA等水平对雌、雄和性畸变不同阶段个体进行了研究,主要研究结果如下:对有机锡污染差异显著的两个采样点进行疣荔枝螺性别形态调查分析,从轻度污染的南澳岛采集到的疣荔枝螺性畸变率极低(性畸变率仅为0.57%),而由污染严重的广澳湾采集到的该螺性畸变率几乎达到100%,表明有机锡污染与其性畸变现象关系密切;大多数畸变个体处在初级和中期阶段,畸变程度严重的个体较少,证明性畸变现象是一个渐近的过程。通过从蛋白质水平检测疣荔枝螺个体间的差异,证明有机锡污染导致性畸变个体的多项生化指标出现了有规律的变化。其中SDS-PAGE和同工酶分析表明,随着雌螺性畸变个体逐渐在形态上出现与雄性个体相似的器官,其体内蛋白表达情况和表达量也有向雄性个体发展的趋向;SOD、LPO和CAT活性(或含量)测定的结果显示,SOD随着性畸变程度的加重,其在螺体内的活力先下降后上升,即在性畸变初期阶段(11阶段)活力开始降低,在性畸变第二阶段(12阶段)活力降到最低点,随后活力又呈上升趋势:而LPO含量和CAT活力随着性畸变的加重,在螺体内的变化趋势与SOD的变化相反,为先上升后下降,变化的转折点也出现在12阶段。本项研究选用了40个随机引物对采自汕头广澳湾的雄性、雌性及性畸变不同阶段疣荔枝螺个体进行了RAPD-PCR扩增,结果有10个引物能扩增出清晰DNA片段,共扩增出170条片段,其中差异性片段40条,证实了来自污染区螺的DNA出现了不正常的变化,推测致使其DNA变化的原因可能与有机锡的污染有一定的相关性。另外对来自mRNA差异显示的片段进行引物设计,用此引物对螺个体基因组DNA进行检测,结果也证实了有机锡污染对其DNA的随机性损伤作用。另外,本研究通过mRNA差异显示技术,检测到1条雌、雄性别间cDNA差异表达片段,对此片段进行回收,并进行二次扩增、克隆和测序,将获得的序列进行cDNA末端快速扩增(RACE),以进行全基因的钓取,最终得到一条部分基因片段(暂时还未克隆出全基因序列),对得到的部分片段进行blast比对分析,发现其与目前已知的核苷酸序列同源性较低,推测此差异片段可能属于一个尚未研究过的基因。……   
[关键词]:有机锡;性畸变;疣荔枝螺;RAPD;DD-PCR;RACE
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:汕头大学2004年