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食品中残留克伦特罗酶免疫检测的研究

贺铁明

  食品安全问题已经成为全球关注的焦点问题之一。近十年来,克伦特罗(ClenbuterolCL)残留致使食物中毒的报道屡见报端,严重损害了人们的健康。酶联免疫吸附检测法(ELISA)和化学发光酶免疫检测法(CLEIA)是两种简便、快速,并非常适合大规模样品筛选的酶免疫检测方法,但国内检测CL的ELISA试剂盒主要依靠价格昂贵的进口试剂盒,严重影响了这两种方法的推广。研制自主产权的快速检测 CL 的 ELISA 试剂盒,已成为监测 CL 非法使用的当务之急。本论文旨在开发快速检测 CL 的 ELISA 试剂盒。首先,重氮化的 CL 分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin, OVA)交联,制备成免疫抗原 CL-BSA 和包被抗原 CL-OVA。免疫原 CL-BSA 按免疫程序免疫新西兰白兔 3 只,5次免疫后,其中一只兔子产生的抗血清效价高达 3.2×105。此抗血清分别经过饱和硫酸铵沉淀法、离子交换法和反向免疫亲和层析法纯化后,得到单一特异性的抗体,平均亲和常数为 4.5×10-9mol/L。以此抗体为基础,设计了间接竞争两步 ELISA(Competitiveindirect ELISA ,ic-ELISA)方法,并优化了缓冲液浓度、pH,Tween20 浓度等实验条件。此 ELISA 试剂盒检测限为 0.096ng/mL,体液(尿液和血液)和组织回收率为 80~120%。通过重复性、灵敏性、准确性、精确性等指标来评估此检测方法,并与 HPLC 法和德国r-biopharm 公司的试剂盒进行了比较。结果表明,此间接竞争 ELISA 各项参数均能达到实际检测的需要。同时本研究对 CLEIA 法检测 CL 进行了探索性研究,改变 ELISA 检测方法的部分条件,CLEIA 法的检测限达到 0.01 ng/mL,比 ELISA 法低 10 倍,显示了该检测方法的优越性。……   
[关键词]:克伦特罗;CL;ELISA;酶联免疫吸附测定;CLEIA;化学发光酶免疫测定;食品安全;兽药残留
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:江南大学2004年