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伪狂犬病病毒新疆株的分离鉴定及其gD和gE基因的克隆与序列分析

陈磊

  从新疆某猪场病死仔猪的脑组织中分离到一株疑为猪伪狂犬病病毒(PRV)毒株,本文通过兔体接种、BHK-21细胞培养、病毒毒力的滴定、中和试验、电镜观察、实验兔、仔猪回归试验、PCR检测病毒等多种方法对该分离株进行了鉴定,结果发现分离的病毒接种实验兔后发生奇痒并麻痹致死;BHK-21细胞培养盲传4代出现典型细胞病变,用BHK-21细胞测定其毒价TCID50为10-10.87/0.1mL;电镜观察可见呈现典型PRV病毒形态学特征;动物试验兔出现典型奇痒症状;仔猪出现典型的症状和病理变化;分离的病毒能中和PRV标准阳性血清; PCR体外扩增可见其与鄂A株在同一水平位置上有相同的电泳带; 根据此分离病毒株的上述特性,鉴定其为猪伪狂犬病病毒,并命名为XIN-W株。 随后研究了XIN-W株的基因特征和分子流行病学背景,对猪伪狂犬病病毒 XIN-W 株相关的毒力基因gD、gE 序列进行了测定和分析。根据已发表的PRVgD、gE基因序列,设计合成了两对引物,经PCR反应分别扩增得到了全长为1209bp、1743bp的gD、gE全基因序列,将它们克隆到pGEM-T-Easy载体中,并转化JM109,挑取阳性菌落的质粒进行PCR、酶切、测序鉴定,与其它参考毒株的gD、gE基因进行比较。结果表明:XIN-W株与其它毒株相比,gD、gE基因核苷酸序列的同源性分别为:97.9%-99.3%,98.0%-98.7%;氨基酸序列的同源性分别为:97.0%-99.3%,97.1%-98.1%。不同的PRV毒株间gD、gE基因在核苷酸水平和氨基酸水平高度保守。遗传进化树显示:XIN-W株和国内其它毒株起源相同,属同一进化分支。该研究从病原、分子水平证实新疆存在PRV野毒株,对于新疆PRV的流行病学研究及诊断和防治具有重要意义。……   
[关键词]:伪狂犬病病毒;分离;鉴定;gD;gE基因;序列分析
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:新疆农业大学2004年