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淫羊藿苷对勃起功能的作用机制研究

田龙

  目的:通过体内实验和分子生物学实验方法研究淫羊藿苷对大鼠勃起功能的药理药效,建立勃起功能障碍(ED)模型后观察淫羊藿苷对其长期治疗效果及作用机制。方法:第一部分:从淫羊藿中提取淫羊藿苷单体,通过体内实验观察淫羊藿苷对勃起功能的效果:给成年雄性Wistar大鼠(重量:300-350g)麻醉下阴茎海绵体内注射不同浓度淫羊藿苷后,利用多导电生理仪电刺激海绵体神经(CN),观察海绵体内压力(ICP)变化来评测该药物对大鼠勃起功能的效果;使用可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)特异性抑制剂ODQ和一氧化氮合酶(NOS)抑制剂LNNA来研究淫羊藿苷升高ICP的机制;同时检测用药后对血压(MBp)的影响。雄性大鼠灌服淫羊藿苷4周后,采用免疫组织化学的方法研究3种NOS亚型的表达变化。第二部分:采用麻醉下结扎大鼠双侧髂内动脉及其分支的方法建立动脉性勃起功能障碍(A-ED)模型,检测血管结扎术后3d、7d、14d和28d观察ICP的动态变化来确认ED模型是否成功、稳定;为研究A-ED模型的机制,采用RT-PCR、Western blot方法观察这些时间点阴茎海绵体内NOS亚型的表达变化并检测NOS活性改变。第三部分:给A-ED模型大鼠随机分4组,灌服不同剂量的淫羊藿苷(5mg,10mg/kg),4周后观察ICP的变化,采用RT-PCR、Western blot方法观察术后3d、7d、14d和28d阴茎海绵体内NOS亚型的表达变化,检测NOS活性改变,探讨淫羊藿苷对A-ED模型勃起功能的效果及作用机制。结果:第一部分:海绵体内注射不同浓度的淫羊藿苷后,可以呈浓度依赖性地提高CN电刺激诱导的ICP,然而对MBp没有显著影响,该药物升高ICP/MBP的半数有效浓度(EC_(50))是2.23μmol/L;对ICP的升高作用可以被ODQ和LNNA所特异性地抑制。对免疫组化结果进行比较分析,灌服淫羊藿苷后正常大鼠阴茎海绵体组织中NOS三种亚型(nNOS,iNOS,eNOS)的表达均有所提高。第二部分:A-ED模型大鼠的ICP在髂内动脉结扎后各个时间ICP出现显著性下降(p<0.05);第3d、7d和14d NOS亚型的mRNA和蛋白表达水平出现不同程度的波动变化,但3种NOS亚型的mRNA和蛋白表达水平在术后第28d都出现明显下调;NOS酶活性在术后1 4d开始出现显著的下降,并且在28d有进一步加重。第三部分:建立A一ED模型4周后,ICP较手术前显著降低,NOS三种亚型的表达水平以及NOS也显著降低。经口服淫羊蕾昔治疗后,ICP有显著改善(P<Ool),并且eN0s表达水平较空白治疗组有所增高,NoS活性也有显著恢复,与ICP的变化有相同的趋势。结论:淫羊蕾普可以呈浓度依赖性地增强大鼠阴茎勃起功能,该作用与NO一cGMP信号通路有关;三种NOS亚型的表达水平下降以及NOS活性降低可能是A一ED模型的发病机制之一,长期口服淫羊蕾营可以通过恢复eNOS的表达水平和NOS活性来改善A一ED模型大鼠的勃起功能,对勃起功能障碍可能具有长期治疗效果,有待于进一步研究。……   
[关键词]:勃起功能障碍;淫羊霍苷;一氧化氮合酶
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:武汉大学2004年