手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)卵黄蛋白及切除眼柄对其积累影响的研究

穆淑梅

  卵黄蛋白是甲壳动物胚胎和幼体生长发育所需的能量和营养来源,因此,它的合成、积累、多寡等等对于胚胎和幼体来说是至关重要的。本文研究了卵黄蛋白的主要成分——卵黄磷蛋白的分离纯化、生化性质等,为最终揭示卵黄蛋白的合成机理奠定基础。同时研究了切除单侧眼柄对于卵黄蛋白积累的影响,为探讨切除单侧眼柄对卵质的影响提供基础资料。1.日本沼虾卵黄磷蛋白的研究利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用不同的染色方法,从成熟日本沼虾卵巢中鉴定出一种卵黄磷蛋白,用电泳洗脱的方法对其进行了纯化,并对其部分生化性质进行了分析。研究发现,日本沼虾卵黄磷蛋白总分子量为458Ku,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析它由三个多肽亚基组成,分子量分别为110Ku,96Ku,89Ku。同时发现,三亚基的过碘酸-Schiff试剂染色反应均呈阳性,说明三亚基上均有糖辅基的结合。样品缓冲液中β-巯基乙醇的有无并不影响亚基的分离,推测亚基间不存在二硫键。采用常规免疫方法,以纯化的卵黄磷蛋白作为抗原免疫家兔,制备卵黄磷蛋白的特异性抗血清。利用此抗血清,并结合双向免疫扩散和组织免疫学方法对日本沼虾的雌性特异蛋白进行了免疫学研究,发现:日本沼虾的卵黄磷蛋白为雌性特异蛋白;卵黄磷蛋白和卵黄蛋白原有相似的免疫原性;肝胰腺可能是其外源卵黄蛋白的合成场所。日本沼虾雌性特异蛋白与其他物种(罗氏沼虾、中国明对虾、凡纳滨对虾、中华绒螯蟹、斑马鱼)的雌性特异蛋白间没有免疫交叉反应。2.切除单侧眼柄对卵黄蛋白积累的影响采用剪烫法去除日本沼虾单侧眼柄,对其卵巢发育、蛋白积累进行跟踪。发现切除眼柄可以加快卵巢发育,使其提早成熟。SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳比较不同时期切除眼柄的实验组与正常未切眼柄的对照组卵巢中可溶性蛋白组分摘要...................................曰................口..................................甲....................................的异同,发现切除眼柄三周后,实验组的蛋白组分发生了一些变化,比对照组多出一分子量约为93Ku的蛋白条带,推测切除眼柄对亲虾卵黄蛋白的积累有一定的影响。利用考马斯亮蓝法(Bradford法)比较实验组与对照组卵巢中总蛋白含量,利用免疫火箭电泳比较成熟卵巢中卵黄磷蛋白含量,发现成熟卵巢中无论是总蛋白含量还是卵黄磷蛋白含量,实验组的都要低于对照组的。可见,切除眼柄虽然可以加快卵巢发育,缩短产卵时间,但是成熟卵巢中总蛋白含量和卵黄磷蛋白含量降低,从而可能影响卵子质量以及幼体的成活率。……   
[关键词]:日本沼虾;卵巢;眼柄;卵黄磷蛋白;电泳;免疫学
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北大学2004年