手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

抗克伦特罗单克隆抗体的研制及其检测试剂盒的初步应用

王宏飞

  克伦特罗(Clenbuterol,CL)是一种人工合成的β2-肾上腺素受体激动剂,能显著促进动物生长、提高饲料报酬和增加瘦肉率,因而曾广泛使用。但其超量使用对人与动物的肝、肾等内脏器官有一定的毒副作用,故现在各国均禁止其在畜牧生产上应用。目前克伦特罗的检测技术主要有色谱技术和免疫分析技术。色谱技术样品处理繁琐费时,成本高,而且需要有经过专门训练的专业人员来操作复杂的仪器设备,不适合大批量样品的筛选。作为一种快速、灵敏、特异的检测方法,酶联免疫吸附测定正逐渐应用于药物的残留检测。本研究通过抗原的合成和单克隆抗体的研制,建立了克伦特罗的ELISA检测方法,研制出克伦特罗检测试剂盒。以重氮化法将克伦特罗小分子与载体蛋白偶联,制备免疫抗原,以此免疫Balb/c小鼠,并取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)方法筛选,最终获得了3株能分泌抗克伦特罗单克隆抗体的杂交瘤细胞。特异性试验证明3C_3单抗有很强的特异性,仅与试验的克伦特罗反应,而不与四环素、沙丁胺醇、肾上腺素等反应,而2F_(12),4F_3单抗不仅能与克伦特罗反应,而且还能与沙丁胺醇反应,但不与肾上腺素、四环素等反应。以重氮化法将克伦特罗与卵清蛋白偶联,将其作为包被抗原(CL-OVA),包被酶标板,克伦特罗为竞争的半抗原,然后将待检样品与定量的抗克伦特罗单克隆抗体反应,通过酶标抗体作用和底物显色,建立了竞争ELISA检测克伦特罗的方法,研制出克伦特罗快速检测试剂盒。实验结果表明,竞争ELISA最佳包被抗原浓度为0.72μg/孔,抗CL-McAb最佳工作浓度为1:1000和1:2000,酶标二抗的工作浓度为1:30000,可测最适范围为1~100ng/mL,最小检测量为0.1ng/mL,克伦特罗单抗对克伦特罗的半数抑制浓度为0.43ng/mL,与沙丁胺醇的交叉反应率为4.3%,与四环素等其它肾上腺素激动剂没有交叉反应,试剂盒的回收率在87%~105%,批内和批间的变异系数分别为2.16%,7.59%。试剂盒在保存期内稳定。……   
[关键词]:克伦特罗;单克隆抗体;酶联免疫吸附;检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:扬州大学2004年