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芥菜胰蛋白酶抑制剂基因mti2转化拟南芥菜的研究

熊先军

  虫害是影响农作物产量和品质的重要因素,因此培育出抗虫品种在生产上具有重要意义。但常规抗虫育种由于育种周期长,种质资源有限,加上抗虫机制不太明了等原因,其利用受到极大的限制。植物基因工程的快速发展为抗性育种提供了一条崭新而有效的途径。芥菜胰蛋白酶抑制剂2(MTI2)是从白芥的种子中分离出来的,它对鳞翅目幼虫中肠内的蛋白酶具有较强抑制作用。因此,芥菜胰蛋白酶抑制剂基冈mti2可作为一种很好的提高植物抗虫性的铒选基因。本研究通过原化渗入转化法,将构建在质粒载体PKYLX-71上的mtj2基因编码的cDNA序列导入拟南芥菜,以进一步研究该基因在寄主植物体内的表达特点和抗虫性。主要实验结果如下:1 利用原位渗入法将mti2基因转入拟南芥菜,最终的转化频率为0.2~2.8%。在转化的过程中用0.02%的表面活性剂Tween 20替代常用的silwet L-77。2 对部分通过卡那霉素筛选的抗性植株进行了PCR和PCR-Southern检测,其中PCR检测的阳性率为98.9%,PCR-Southern检测的阳性率为100%。可以初步确定目的基因已经整合到寄主植物的基因组中。3 对部分通过PCR检测的植株进行一步法RT-PCR检测,在80个被检测单株中,每个单株都获得了特异的扩增条带,所以初步确定目的基因在寄主植物体内得到表达。……   
[关键词]:拟南芥菜;胰蛋白酶抑制剂;原位渗入法
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:湖南农业大学2004年