手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

奥利亚罗非鱼DMRT1基因的克隆及其性别决定机制的研究

王光花

  在脊椎动物中,鱼类是性别决定方式最为多样的一个类群。与高等脊椎动物一样,鱼类性别决定的基础仍然是遗传基因,但不同的是在许多鱼类,决定性别的基因并不明显地集中于性染色体上,常染色体上的基因更多地参与到性别决定中。另外,在发育早期,鱼类的性别更明显地表现为双向潜力:某些外部环境因素能在不同程度上影响鱼类的性别分化,从而使鱼类性别决定机制更加复杂。由于鱼类的性别决定机制是多样的和易变的,因而可以通过分子生物学的研究从基因水平进行探讨,来揭示罗非鱼的性别决定机理,为进一步提高罗非鱼雄性率奠定基础。DMRT(DM-related transcription factor)基因是哺乳类,爬行类,鸟类,以及鱼类等动物上的性别相关基因,形成DMRT基因家庭,编码一种结合在DM-binding motif(DM-domsin)的蛋白质,DMRT1基因在鱼类雄性分化方面起着关键的作用。它含有果蝇里的dsx(double-sex)基因和线虫里的mab-3基因共有的DM-domain(doublesex和mab-3基因编码的蛋白质结合的DNA基序)。本研究拟对奥利亚罗非鱼的DMRT1基因与其它鱼类的DMRT1基因进行比较,分析,为以后进一步研究罗非鱼性别分化相关基因打下基础。1.DM-domain区的扩增根据已知鱼类DM-domain区的保守序列,设计上游引物P1和下游引物P3,扩增得到奥利亚罗非鱼DMRT1基因的DM-domain区序列158bp,将158bp碱基片段在NCBI网站上进行BLASTP分析,扩增出的158bp碱基与尼罗罗非鱼的DMRT1基因同源性最高,达到148个相同的碱基,96%的相似性。其次为黑鲷的DMRT1基因,由于扩增出的区域是DM-domain的保守序列,所以在虹鳟,乌拉圭牙汉鱼,黑青斑河豚,红鳍东方,黄鳝,大西洋真鳕,青鳉鱼等动物的DMRT1基因中都呈现出较高的相似性。2.雄鱼特异条带的扩增(male specific motif)根据得到的DM-domain区的保守序列,设计上游引物P5,根据已知鱼类male specinc motif的保守序列,设计下游引物P4,扩增得到481bp,,其中奥利亚罗非鱼DMRT1基因的雄鱼特异保守序列(male specific motif)72bp,将male speciflc motif碱基片段在NCBI网站上进行BLASTP分析,与尼罗罗非鱼的DMRT1基因同源性最高,100%的相似性。其次为黑鲷的DMRT1基因,在虹鳟,乌拉圭牙汉鱼,黑青斑河奥利亚罗非鱼DMRTI基因的克隆及其性别决定机制的研究豚,红鳍东方,黄鳝,大西洋真鳍,青鳃鱼等动物的DMRTI基因中都呈现出较高的相似性。3.3’RACE的扩增根据扩增出的DM一domain的序列,设计上游引物Primers,Primer6,用3’.RACE(rapid田力plification of cDNA ends)法从奥利亚罗非鱼精巢中分离和测定了DMRTIcDNA的序列。3’.RACE扩增得到1 086bp的片段,共编码254个氨基酸,与尼罗罗非鱼、黑纲、黄鳝、新月鱼、虹缚、青鳃鱼等动物的DMR江,1的氛基酸序列进行比较,同源性分别为:99%,80%,78%,73%,62%,41%。说明DMRTI基因在同物种中有高度的同源性.和尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼等动物的DMO氛基酸序列进行比较,同源性分别为:26%,26%。这么低的同源性说明雄鱼和雌鱼的性别决定机制有很大的不同。有关DMRTI基因表达的蛋白及其功能,还有待于进一步研究.……   
[关键词]:奥利亚罗非鱼;性别决定;DMRT1;RACE
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:南京农业大学2004年