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鸭肝炎病毒的分离与检测

刘建

  本实验通过鸭胚尿囊腔接种,对我国几个省市采集的12份死于疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离,获得12个病毒分离株。这些分离株对10日龄鸭胚的致死率为100%,人工感染6日龄雏鸭的致死率为0-100%不等。死亡鸭呈角弓反张姿势,剖检可见肝脏肿大,有出血点或出血斑。将12株分离株经鸭胚传至第5代,收集鸭胚尿囊液毒测定这些毒株的ELD_(50)为10~(-7.32)/0.2ml-10~(-3.5)/0.2ml不等。用鸡抗1型DHV及新型DHV的血清和12株分离株进行中和试验,结果表明:有7株为新型DHV,有2株为1型DHV,还有3株无法确定其血清型。通过对新型弱毒株(B株)进行鸭胚传代致弱后,稀释成不同倍数对1日龄雏鸭进行免疫,并于10日龄时用新型鸭肝炎强毒攻毒,观察雏鸭的死亡情况。由结果可知,B_(20)株在20倍稀释时,保护率达100%,而稀释到100倍时则完全失去保护作用。同时对免疫的雏鸭采血,中和试验测定血清的效价。免疫雏鸭在第10天时抗体水平达到高峰,然后呈逐渐下降趋势。结果表明,B株经过鸭胚传代致弱后在毒力下降的同时仍保留一定的免疫原性,可以作为疫苗的候选株。此外,本实验用鸭胚肝细胞(DEL)培养了新型鸭肝炎病毒,并详细观察了鸭肝炎病毒引起的细胞病变,发现该病毒适于鸭胚肝细胞上培养。通过细胞免疫荧光染色,发现肝细胞本身自发荧光,不适于免疫荧光检测;采用感染新型鸭肝炎强毒后死亡鸭的肾细胞做滴片进行荧光染色,可检测到病毒抗原存在,为临床上快速诊断新型鸭病毒性肝炎提供一种检测方法。……   
[关键词]:中和试验;免疫荧光试验;新型鸭肝炎病毒
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业大学2004年