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耐大环内酯类药物鸡毒支原体的诱导和耐药基因的突变分析

吴惠明

  在含有递增浓度红霉素或替米考星的液体培养基中连续传代培养鸡毒支原体S6和BG44T药物敏感菌株,使其逐渐产生耐药性,然后筛选出高度耐药菌株。红霉素对筛选出的S6耐红霉素株和BG447耐红霉素株的MIC≥436.7 μg/ml,替米考星对筛选出的S6耐替米考星和BG44T耐替米考星的MIC≥400μg/ml。耐红霉素的S6和BG44T菌株同时对替米考星、泰乐菌素、林可霉素有交叉耐药性。耐替米考星的S6和BG44T菌株对红霉素、泰乐菌素、林可霉素有交叉耐药性。23SrRNAV区域基因突变与细菌产生大环内酯类耐药性有关。为了检测鸡毒支原体的23SrRNAV区域基因是否发生耐药突变,首先把鸡毒支原体上处于两个不同位置的23SrRNAV区域基因(论文中分别将这两处基因称为23rrn1和23rrn2)区分开来。对鸡毒支原体酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳,将凝胶上的DNA转移到尼龙膜上,进行杂交,确定了含有23SrRNAV区域基因的限制片段的位置。将这些限制片段分离出来,进行PCR扩增和克隆。结果表明S6耐红霉素菌株的23rrn1在2058位发生了耐药相关突变,rrn2未发生耐药相关突变。S6耐替米考星株的23rrn1未发生耐药相关突变,23rrn2在2058、2504处发生了耐药相关突变。BG44T耐红霉素的23rrn1发生了2458位耐药相关突变,23rrn2发生了2057、2059位耐药相关突变。BG44T耐替米考星株的23rrn1未发生耐药相关突变,23rrn2发生了2504、2058位耐药相关突变。……   
[关键词]:耐药性;大环内酯类;鸡毒支原体;红霉素;替米考星
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国农业大学2004年