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猪链球菌的耐药性检测及中草药对其耐药性的影响

杨建江

  耐药性猪链球菌(S.suis)呈世界性分布,且耐药性有明显增加的趋势,已给临床应用大环内酯类、β-内酰胺类等抗生素防治猪链球菌病带来诸多困难。因此,对该菌的耐药性监测、耐药机制及耐药性的克服的研究已引起人们的高度重视。一些中草药具有抑菌或抗菌作用,此外,部分中草药具有消除细菌的耐药质粒作用,国内外已有用天然药物抑制细菌的多药耐药外输泵的报道。本研究对长春地区不同来源的猪链球菌进行了耐药性的检测,耐药分子机制的分析,并研究了所选取的中草药对耐药性猪链球菌的生物学作用,在用中草药抑制细菌的耐药性方面做一些有益的尝试。采用药敏纸片扩散法、双纸片扩散法和微量稀释法对该地区猪链球菌的耐药性进行检测。结果显示:所有受试菌株均对β-内酰胺类抗生素不耐药,5%的菌株对利福平耐药。82~100%的菌株对喹诺酮类、氯霉素、四环素类、氨基糖苷类、大环内酯类和林克酰胺类(MLS_B)抗生素耐药;86%的菌株为多重耐药株(MDR)。91%菌株为MLS_B型耐药(其中,95%为构成型(CR))。统计数据表明,除青霉素外,对其它5种抗生素的MIC_(50)和MIC_(90)高度集中在高耐药区(≥128μg/ml)。以猪链球菌的染色体和质粒DNA为模板,PCR扩增所有菌株的ermB基因,将其中6株的PCR产物纯化后,连接到pMD18-T克隆载体上,经PCR和酶切鉴定、测序以及同源序列分析,结果显示:不同的菌株间的ermB基因有明显差异,与Genebank中的肺炎链球菌和粪肠球菌等细菌的ermB基因序列进行比较,有98%以上的同源性。表明长春地区猪链球菌对MLS_B类抗生素的耐药是以CR型耐药为主,由ermB基因编码的红霉素甲基化转移酶(erm)所介导的耐药,但ermB基因不属于同一来源,且与人源及动物源性细菌ermB基因可能存在着广泛的交换。采用常规中草药药敏实验方法,筛选到九种对多重超强耐药的猪链球菌菌株有明显抑制作用的中草药,其中,中草药V的MIC值最低(16 mg/ml)。但所选中草药和红霉素联合用药,对耐药性猪链球菌呈现弱的协同作用。耐药菌株在2倍MIC以下的中草药中处理16~72h后,结果显示,在6~12h内MLS_B的MIC值为4~32μg/ml,16h后恢复原MIC值(128~256μg/ml)。结果表明:所选中草药对MLS_B类抗生素抑制耐药性猪链球菌的作用呈现明显的时间依赖性。……   
[关键词]:猪链球菌;耐药性;ermB基因;中草药
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国人民解放军军需大学2003年