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新城疫病毒血凝素—神经氨酸酶模拟表位及其免疫生物学特性研究

孙林

  新城疫(ND)是由新城疫病毒(NDV)引起禽类的一种急性传染病,被国际兽疫局列为对畜禽危害最大的A类传染病之一。目前已获得多株NDV血凝素—神经氨酸酶(HN)的基因核苷酸序列,但对其抗原模拟表位的研究还鲜有报道。本研究以生物素标记的NDV HN单抗M22为分子探针,应用亲和筛选法从噬菌体12肽库中筛选出了该单抗所识别的模拟表位。经过三轮亲和筛选、洗脱、扩增后,在富集试验、投入产出比试验中均证实阳性克隆明显富集。从第三轮筛选洗脱物中,随机挑取纯化20个分隔明显的单个克隆,经夹心ELISA测定有4个克隆与McAb有较高的结合特性。通过竞争ELISA进一步证实NDV可竞争性地抑制其中一个噬菌体克隆CLONE 20与M22的结合,其抑制率达到67.3%,提取阳性克隆CLONE 20的ssDNA,电泳鉴定后测序,得到展示肽的序列为SWFHHHQARAPM。用软件分析比较展示肽与新城疫F48E8、La Sota毒株HN序列的同源性,推断WF和QAR在HN的抗原性中起主要作用。同时用在线蛋白分析工具预测F48E8、La Sota毒株HN的抗原表位,展示肽有部分序列位于预测表位内。动物试验表明CLONE 20能诱导SPF鸡、BALB/c小鼠产生一定水平的特异抗体。以CLONE 20加佐剂免疫的SPF鸡,三免后HI几何平均效价为1:5.1,ELISA几何平均效价为1:78.2。仅用CLONE 20免疫的SPF鸡,三免后HI几何平均效价为1:3.3,ELISA几何平均效价为1:26.4。而阴性对照组和健康对照组SPF鸡均没有产生HI、ELISA效价。经统计学分析,SPF鸡免疫组HI和ELISA效价明显高于阴性对照组、健康对照组。同时免疫组中,使用佐剂组与不使用佐剂组差异不显著。以CLONE 20加佐剂免疫的BALB/c小鼠,三免后HI几何平均效价为1:3.7,扬州大学硕士学位论文ELISA几何平均效价为l:59.7。仅用CLONE20免疫的BALB/c小鼠,三免后Hl几何平均效价为1:2.7,ELISA几何平均效价为l:52.0。而阴性对照组和健康对照组BALB/c小鼠均没有产生HI、ELISA效价。经统计学分析,BALB/。小鼠免疫组Hl和EUSA效价明显高于阴性对照组、健康对照组。而免疫组中,使用佐剂组与不使用佐剂组差异不显著。综上所述,本研究筛选到的多肤SwFHHHQARApM是NDv HN单抗M22所识别的模拟表位,该表位具有良好的免疫生物学特性。这为进一步研究1引闪抗原分子的结构与功能、1刃N抗原免疫机制提供了新材料,为研发新城疫模拟表位疫一苗奠定了重要基础。……   
[关键词]:新城疫病毒;血凝素-神经氨酸酶;单抗;亲和筛选;模拟表位
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:扬州大学2003年