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磺胺对甲氧嘧啶单克隆抗体的制备及应用

彭会建

  磺胺类药物有广泛的抗菌特性,经常用于防治动物的疾病,这也导致了在可食用动物组织中的残留,最终对食品卫生和人类健康造成危害。许多国家已经规定磺胺药在人类食用组织中的残留限量为0.1mg/kg。国内外已建立了很多理化方法检测动物性食品中残留的磺胺药。虽然有些方法比较灵敏精确,但由于花费大、时间长、技术要求高等原因而不适合大批量样品的筛选。作为一种快速、灵敏、特异的方法,酶联免疫吸附测定正逐渐应用于药物的残留检测。本研究通过抗原的合成和抗体的制备,建立了SMD的ELISA测定方法,并检测了实验条件下鸡和猪体内SMD的残留变化。为了制备针对SMD的单克隆抗体,用戊二醛将SMD偶联到牛血清白蛋白(BSA)或卵清蛋白(OVA)。用紫外分光光度计进行了扫描鉴定。本偶联方法是通过SMD的N~4端偶联到载体蛋白上,在这种情况下,特异的N~1端被免疫系统识别,这最终导致产生针对SMD的高特异性的抗体。将100μl含50μg SMD-BSA偶联物的PBS与100μl的福氏完全佐剂制成乳剂,用其注入7周龄的BALB/c小鼠的腹部皮下。每隔2~3w后,用100μl含25μg SMD-BSA偶联物的PBS与100μl的福氏不完全佐剂制成乳剂进行增强免疫。经过3次增强免疫后,小鼠进行最后一次抗原冲击,3d后取其脾细胞。新鲜的脾细胞用来与骨髓瘤细胞进行融合。用间接ELISA和间接竞争ELISA来筛选阳性细胞。阳性孔的上清可与SMD-OVA反应,且这种反应可被SMD竞争。用有限稀释法将阳性孔细胞进行克隆(重复三次)。最终产生了三株稳定分泌针对SMD抗体的细胞:3E8、4A7、2D2。将3E8细胞注入5只BALB/c小鼠的腹腔,制备出腹水。建立起间接竞争ELISA的测定方法。以SMD浓度的对数为横坐标,抑制率为纵坐标,作标准曲线。用这种方法确定的检测限为1.766ng/ml,定量限为11.274ng/ml。为检验抗体的特异性,用SD、SMM、SQ等8种药物作为竞争抗原,做ELISA,结果显示与这8种磺胺药没有交叉反应。为了验证实际检测效果,鸡和猪在给予一定剂量的SMD后,采集肝、肾、血清等样品,并进行了检测,结果显示,在鸡上,SMD的休药期至少为14d。……   
[关键词]:酶联免疫吸附;磺胺对甲氧嘧啶;单克隆抗体;残留测定;检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:扬州大学2003年