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大白菜花药和游离小孢子培养技术体系的研究

邹金美

  生物技术的不断发展和完善,为大白菜育种提供了新的思路和手段,花药培养和游离小孢子培养技术的应用大大加快了大白菜的育种进程。本课题以13份春、夏大白菜为材料,从2001年春到2002年冬进行花药和游离小孢子培养,同时对花培材料的快速繁殖、倍性鉴定、染色体加倍及大白菜真叶的再生进行了相关的研究探讨。结果如下:1.花蕾外观特征与小孢子发育时期的关系:通过细胞学观察表明,当花蕾长为2.0-3.0mm,花瓣与花药长度之比为1/2~4/5时,50-70%的小孢子发育处于单核晚期,最适合进行花培。2.花药培养:不同的基因型材料具有不同的胚状体的诱导能力,在接种的13份材料中,126最容易诱导得到胚状体,诱导效率达13.71%;不同的培养基的培养效果也有差异,本研究中以蔗糖浓度为10%、有机成份加倍的Keller培养基的诱导效率最高,可达到17.58%,MS和Nitch培养基的诱导效率不高;花药培养胚状体的出现主要在接种后的15~30天之间。3.游离小孢子培养:采用NLN-13液体培养基进行游离小孢子培养。由培养结果可见基因型不同,胚状体的诱导率有极大的差异,最易形成胚状体的材料是123,诱导效率达16.51%;在本实验中,3-5℃低温预处理48小时对胚状体的诱导无显著的影响;而细胞分裂素6-BA0.2mg/L和生长素NAA0.05mg/L的应用则可以明显提高胚状体的诱导效果。4.胚状体成苗、试管苗快繁和移栽:胚状体转移到琼脂1.0%、蔗糖2.0%、6-BA0.2mg/L的B_5培养基上成苗;花药培养得到的胚状体成苗率为72.73%,而游离小孢子培养的只有54.61%,花药培养的成苗率显著优于游离培养的。花粉植株的快速繁殖以B_5+6-BA1.0mg/L+NAA0.25mg/L的繁殖系数最高,可达500%;大白菜试管苗玻璃化现象严重,用透气膜代替一般的封口膜可以大大降低玻璃化,提高胚状体成苗率;移栽成活率达到90%以上。5.花粉植株的鉴定:应用形态学和解剖学特征可以快速初步鉴定花粉植株;染色体鉴定单倍体植株n=10,正常二倍体2n=20;流式细胞仪可以快速而准确地测定单倍体材料DNA含量为二倍体的一半,鉴定结论极为可靠;结合上述几种鉴定方法,可以在短期内对大量的花培材料进行快速而准确的鉴定。6.染色体加倍:大白菜的花粉植株自然加倍率为40-70%,基因型不同,加倍效率也有差异。利用秋水仙素结合组织培养诱导试管苗加倍,以秋水仙素浓度为loom叭、处理时间10天为宜。7大白菜真叶的再生的初步探讨:真叶的再生以BS+6.BA2.omg几+N AAO.smg/I‘论AI.om叭+ABAO.25 mg几+AgNo3 5.om叭的处理效果最好,再生效率可达600/0左右。……   
[关键词]:大白菜;花药培养;游离小孢子培养;细胞学观察;快繁;倍性鉴定;染色体加倍;真叶再生
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:华中农业大学2003年