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桑叶中DNJ分离纯化及含量测定的研究

杨海霞

  本实验用蒸馏水提取桑叶中的DNJ,然后再过阳离子交换柱层析对DNJ进行初步纯化,最后用分光光度法测定桑叶中DNJ的含量,并比较了不同pH段收集的桑叶样品中的DNJ含量,以及不同处理方法、不同采收时期、不同叶位的桑叶样品中DNJ的含量。结果表明,用分光光度法测量桑叶中的DNJ含量是可取的,不同pH段、不同处理方法、不同采收时期,不同叶位的桑叶样品中DNJ的含量有一定差别。试验研究共分七部分:(1)DNJ的分光光度法测定选定DNJ的特异吸收波长是利用分光光度法测定桑叶中DNJ含量的必要条件。DNJ本身无紫外或可见光吸收,必须加入一种显色剂使DNJ显色才可。本试验选用碘—碘化钾试液作显色剂,DNJ标准品加显色剂后,以水+显色剂作空白对照,在300nm~450nm下测定不同波长对应的吸光度,得到一吸收光谱曲线。根据吸收光谱曲线及Lambert-Beer定律,确定DNJ特异吸收波长为334nm。将DNJ标准品配成0.1mg/ml的标准溶液。DNJ按不同的浓度梯度分别加入试管中,再加入显色剂和水,混匀。以水+显色剂作为空白对照,在334nm下测量各个试管中溶液的吸收值。以DNJ标准溶液的浓度为横坐标,以相应的吸收值为纵坐标,绘制标准曲线。结果表明,在一定的DNJ浓度范围内,溶液的吸光度与DNJ浓度呈正比关系,符合Lambert-Beer定律,可用分光光度法测量桑叶中DNJ含量。(2)桑叶DNJ的提取称取60g干燥桑叶(含水率9.8%),放入蒸馏烧瓶中,加入蒸馏水,加热回流提取2小时,倒出提取液。二次提取后,合并两次提取液,并进行过滤。将滤液进行加热浓缩至一定体积,即得到桑叶DNJ的提取液。(3)桑叶DNJ的纯化将桑叶DNJ的提取液过阳离子交换柱进行DNJ的纯化。即经树脂处理,装柱,上柱,洗脱收集,浓缩,干燥等步骤得含DNJ的桑叶提纯物。该提纯物为淡棕黄色粉末。(4)桑叶DNJ样品中不同pH段DNJ含量的测定在桑叶提取液过阳离子交换柱纯化DNJ后,按收集液的不同pH段分别收集、干燥,配成溶液后,测定其中的DNJ含量。结果表明,pHg.4一10.5的收集液中含有DNJ,桑叶中含量为0.024%,桑叶提纯物中DNJ含量为2.22%,为桑叶中含量的近10倍,而其他两个pH段(Ph3一7和Ph7一9.4)的收集液中几乎不含DNJ。(5)纯化前后桑叶DNJ含量的比较取两份桑叶,一份只用水进行回流提取而不进行纯化,另一份既用水提取又过阳离子交换柱进行纯化。收集物干燥后,将得到的纯化前后的桑叶样品配成溶液,测定桑叶和提纯物中DNJ含量。结果表明,纯化前的桑叶中DNJ含量略高于纯化后的桑叶,而纯化前的桑叶提取物中DNJ含量明显低于纯化后提纯物中DNJ含量。(6)不同季节的桑叶DNJ含量的差异将春季和秋季采摘的桑叶分别用水提取后,将提取液过阳离子交换柱进行纯化,收集液冷冻干燥后,将两份干燥物配成溶液,分别测定桑叶和提纯物中DNJ含量。结果表明,秋季桑叶和提纯物中DNJ含量均高于春季桑叶和提纯物中DNJ含量。(7)不同叶位桑叶中DNJ含量的差异将秋季桑叶的上位叶和下位叶分别用水提取后,将提取液过阳离子交换柱进行纯化,收集液冷冻干燥后,将两份干燥物配成溶液,分别测定桑叶和提纯物中DNJ含量。结果表明,桑叶上位叶和提纯物中DNJ含量均明显高于下位叶和提纯物中DNJ含量。本试验结果表明,用分光光度法可以测定桑叶中DNJ含量,从不同的桑叶中DNJ含量的比较结果看,不同的桑叶中DNJ含量有一定差异,进行桑叶中DNJ提取时为得到较多DNJ,以选用秋季上位叶为好,且在开发桑叶产品时,用桑叶提纯物比直接用桑叶作原料更有实用价值。……   
[关键词]:桑叶;DNJ;分光光度法;离子交换树脂纯化
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:浙江大学2003年