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关木通肾毒性与剂量时间相关性及复方配伍减轻其毒性的实验研究

丁英钧

  传统中药是祖国医学宝库中重要的组成部分。随着中药应用的国际化,含马兜铃酸类中草药如关木通、广防己应用不当可以引起肾脏损害已日益受到重视,不断有相关临床报道和研究在国际重要学术刊物上发表,在国际上造成了很大的影响,部分国家如美国FDA、英国MCA和比利时政府等采取了措施,禁止含马兜铃酸的十余种中草药和中成药进口、销售和使用。针对这一形式,中医药工作者应拿出翔实的材料进行科学的答复。为此,我们选用关木通进行了系列研究,以期客观评价关木通肾毒性。第一部分 关木通肾毒性与剂量时间相关性研究目的:研究关木通慢性肾损伤的功能改变和病理学变化与投药剂量、用药时间之间的关系方法:取60只SD雌性大鼠随机分为4组,实验组为A、B、C组(每组16只),D组为正常对照组(12只)。A、B、C组按1g.kg-1.d-1(相当于成人6g.d-1,药典规定剂量)、2g.kg-1.d-1、4g.kg-1.d-1三个不同剂量分别给予关木通水煎液灌胃,D组以等体积饮用水灌胃,每日一次,连续给药 12周。给药期间大鼠自由进食、摄水。12周后,继续饲喂2周。实验自首次给药之日起,分别于第6、12、14周末大鼠尾静脉取血,用代谢笼留取大鼠24小时尿液,测定相关肾功能指标。实验组第6、12、14周末各组宰杀4、8、4只大鼠,对照组每次宰杀4只,留取部分肾组织进行形态学检查,其余肾组织匀浆后测定相关指标。结果:⑴、低剂量组(A组)持续给药3个月,相关肾功能检测指标与正常组相比无统计学差异(p>0.05),肾脏病理未见明显改变,说明3个月观察期内按1g.kg-1.d-1剂量(药典规定剂量)使用关木通没有出现肾毒性。⑵、中剂量组(B组)6周时未发现明显肾损伤迹象;12周时尿β2-MG与正常组相比明显升高(p<0.05),余项肾功能检测指标无统计学意义(尿蛋白有增高趋势),光镜仅见近曲小管刷状缘脱落,部分肾小管上皮细胞空泡变性,电镜可见近曲小管管腔微绒毛排列整齐,线粒体水肿,部分嵴消失,肾间质纤维细胞有许多线粒体,细胞表面有小的突起,少量粗面内质网,细胞质少,为非活动期成纤维细胞。而停药2周后尿β2-MG及病理改变恢复,说明肾小管功能损害较轻,是可逆的,为非损害作用(non-aderse effect即机体发生的生物学变化是在机体代偿能力范围内,是暂时的和可逆的)。⑶、高剂量组(C组)6、12、14周时尿蛋白、血尿β2-MG、尿NAG、γ-GT显著升高(分别为 p<0.05、p<0.01、p<0.05), 尿糖、血BUN、Scr 12周末显著升高(p<0.05);6、12、14周肾组织中TNFα含量较正常组增高分别为(p<0.05、p<0.01、p<0.01);光镜6周可见肾小管上皮细胞空泡变性、颗粒变性,部分坏死,肾间质无明显病变或轻度水肿;12周可见肾小管上皮细胞中/重度空泡变性或颗粒变性,大量坏死,肾间质明显水肿,可见轻/中度纤维化;电镜可见近曲小管管腔微绒毛大面积变性坏死,线粒体高度水肿,肾间质细胞稀疏排列,毛细血管增多、充血,间质胶原纤维轻/中度增生。这说明随着用药时间的延长肾脏损害逐渐加重,停药2周后出现不同变化,实验动物肾功能有一定程度的恢复,14周时光镜可见部分肾小管腔变薄或肾小管萎缩,肾间质不同程度纤维化,部分肾间质纤维化加重,肾损害有加重趋势。提示此期肾损害不稳定,有向两极发展趋势。结论:关木通肾毒性是相对的,在三个月观察期内药典法定剂量对大鼠肾功能及病理结构无不利影响,而剂量增大就会产生肾毒性,且与剂量、用药时间呈正相关。实验二 复方配伍减轻关木通肾毒性的实验研究目的:观察关木通复方配伍对大鼠肾功能、病理形态学的影响以及药液马兜铃酸含量的变化。方法:⑴、龙胆泻肝丸、导赤散与单味药关木通肾毒性比较实验:取30只SD雌性大鼠随机分为4组,实验组为A(关木通组)、B(龙胆泻肝丸组)、C(导赤散组)组(每组8只),D组为正常对照组(6只)。A、B、C组分别给予关木通水煎液、龙胆泻肝丸水液、导赤散水煎液(给药标准按含关木通4g.kg-1.d-1计算)灌胃,D组以等体积饮用水灌胃,每日一次,连续给药 12周。给药期间大鼠自由进食、摄水。于实验第12周末大鼠尾静脉取血,用代谢笼留取大鼠24小时尿液,测定相关肾功能指标。宰杀后留取部分肾组织进行形态学检查,其余肾组织匀浆后测定相关指标。⑵、高效液相色谱法检测药液马兜铃酸含量:分别取关木通、龙胆泻肝丸、导赤散水煎液,0.45μm滤膜滤过,进样20μl,记录峰面积,计算马兜铃酸含量。色谱条件为:以甲醇-水-冰乙酸(72:27:1)为流动相;检测波长315nm;流速为1.0ml.min-1;灵敏度为0.5AUFC。在此条件下,马兜铃酸的色谱分离度大于2.0,理论塔板数不小于2000,保留时间(tR)约为15.4min,不对称因子1.0~1.20,无代谢物或其他杂质峰干扰。结果:⑴、龙胆泻肝丸、导赤散与关木通肾毒性比较实验结果:A组相关肾功能检测指标与D组相比均明显增高(p<0.01);光镜可见肾小管上皮细胞中/重度空泡变性或颗粒变性,大量坏死,肾间质水肿,轻/中度纤维化;电镜可见近曲小管管腔微绒毛大面积变性坏死,线粒体高度水肿,嵴消失,肾间质细胞稀疏排列,毛细血管增多、充血,间质胶原纤维轻/?……   
[关键词]:关木通;马兜铃酸;龙胆泻肝丸;导赤散;肾毒性;复方配伍
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:河北医科大学2003年