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PCR和核酸探针检测猪源沙门氏菌四环素耐药基因tetC的研究

代敏

  本研究应用平板稀释法对规模化猪场分离的16株猪源致病性沙门氏菌进行药敏试验,测定了它们对四环素类抗菌素(四环素、土霉素、金霉素)的最低抑菌浓度(MIC),参照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)(1997)的标准,判定菌株的耐药性。结果表明,16株致病性沙门氏菌对四环素类抗菌素产生了普遍耐受性,耐药率达100%,其中MIC值>128(μg/mL)的高耐药菌株13株,高耐药率81.25%,MIC为32(μg/mL)的低耐药菌株3株,低耐药率18.75%。且沙门氏菌对四环素类抗菌素存在交叉耐药性,即一旦沙门氏菌对四环素类中的一种抗生素产生耐药性,则将对同类其它品种抗生素也产生耐药性。根据文献报道及GenBank中注册的tetC基因序列设计引物,在国内首次用PCR技术对16株猪源致病性沙门氏菌的四环素耐药基因tetC进行了扩增,结果在以染色体为模板的扩增体系中,未见有特异性产物;在以质粒为模板的扩增体系中,12株菌株获得特异性扩增产物,扩增产物大小约400bp,与药敏试验的阳性符合率达75%,具有较高的检出率,表明猪沙门氏菌四环素耐药基因tetC只存在于质粒上。对tetC与血清型、MIC值、地理来源之间的关系分析表明tetC的有无与血清型、MIC值、地理来源无明显相关性。对来源不同、MIC值分别为32μg/mL(DYPS1)和128μg/mL(SLPS1-3)的2株菌株的PCR扩增产物进行序列测定,并与pBR322(GenBank Accession No:J01749)的四环素耐药基因tetC进行序列比较,结果表明,菌株DYPS1、SLPS1-3和pBR322三者之间tetC的核苷酸同源率为97.7%~98.7%。在国内首次采用光生物素对高耐药菌株(SLPS1-3)的PCR扩增产物进行标记,制备核酸探针,用菌落原位杂交对猪源致病性沙门氏菌的tetC基因进行了检测,并对杂交条件进行优化。结果表明,13株受试菌株呈阳性,3株受试菌株呈阴性,与PCR检测结果阳性符合率达93.75%,具有较好的重复性,制备的tetC探针具有较高的特异性和灵敏度。本研究通过试验条件的筛选和优化,建立的猪源致病性沙门氏菌四环素耐药基因tetC的PCR和核酸探针检测技术,可用于规模化猪场沙门氏菌四环素耐药性的分子流行病学监测。……   
[关键词]:四环素耐药基因;tetC;PCR;核酸探针;检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2003年