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PCR技术检测猪源沙门氏菌链霉素、卡那霉素耐药基因(aadA、aadB)的研究

张之文

  本研究采用琼脂平板稀释法测定了规模化猪场分离的16株猪源致病性沙门氏菌对4种氨基糖甙类药物(链霉素、卡那霉素、新霉素及庆大霉素)的最低抑菌浓度(MIC),参照美国临床实验室标准委员会(NCCLS)标准(1994),判定菌株的耐药性。结果表明,16株致病性沙门氏菌对四种氨基糖甙类药物产生了不同的耐药率,其中链霉素耐药率62.5%,卡那霉素耐药率56.25%,新霉素和庆大霉素的耐药率均为18.75%。根据GenBank中注册的沙门氏菌链霉素耐药基因aadA(编码3 -O腺苷酸转移酶)和卡那霉素耐药基因aadB(编码2 -O腺苷酸转移酶)的基因序列分别设计引物,对链霉素耐药基因aadA和卡那霉素耐药基因aadB进行PCR检测。结果表明:10株耐链霉素的菌株中9株呈现阳性,扩增产物大小约530bp,aadA基因的检出率为90%;9株耐卡那霉素菌株中7株呈现阳性,扩增产物大小约330bp,aadB的检出率为77.8%。对3株不同来源和耐药率的沙门氏菌链霉素耐药基因(SLPS2-2和ZGPS2-1的MIC值为128μg/mL;GHPS1的MIC值为64μg/mL)aadA基因的PCR产物进行了序列测定,并与GenBank中注册的伤寒沙门氏菌的链霉素耐药基因aadA进行了比较,结果表明:SLPS2-2、GHPS1、ZGPS2-1与AY125351的核苷酸序列同源率分别为97%、98.2%和95.5%,GHPS1与SLPS2-2的核苷酸序列同源率为95.2%,GHPSl与ZGPS2-1的核苷酸序列同源率为93.1%,SLPS2-2与ZGPS2-1的核苷酸序列同源率为92.1%。核苷酸序列同源性分析结果表明,3株不同来源和耐药率的沙门氏菌链霉素耐药基因序列的同源率很高。本研究通过试验条件的筛选,在国内首次建立了猪源致病性沙门氏菌aadA、aadB基因的PCR检测技术,该技术可用于沙门氏菌对链霉素、卡那霉素等抗生素耐药性的分子流行病学监测。……   
[关键词]:沙门氏菌;氨基糖甙类耐药性;PCR;链霉素耐药基因(aadA);卡那霉素耐药基因(aadB);检测
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:四川农业大学2003年