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青岛近岸不同环境中海洋弧菌的检测及用PCR方法快速检测病原鳗弧菌

于德华

  浩瀚的海洋是生命的摇篮。由于海洋环境的特异性,海洋微生物表现出在物种、种内遗传变异和生态功能上的多样性,即海洋微生物多样性(Marine microbial diversity)。弧菌科(Vibrionaceae)细菌是一种菌体短小,直或弯曲的革兰氏阴性菌,作为近海河口环境中微生物区系的成员,广泛分布于半咸水、河口、海洋的水体和沉积物中。弧菌科主要包括弧菌属(Vibrio)、气单胞菌属(Aeromonas)、邻单胞菌属(Plesiomonas)和发光杆菌属(Photobacterium)。其中弧菌属(Vibrio)的细菌种有37种以上。目前对弧菌科的多样性研究越来越集中到病原种类上。弧菌与人类关系密切,是引发人类细菌性疾病的主要病原之一。人们通过饮用不清洁水,食用未加工或未加工熟的带有致病弧菌的食物特别是海产品感染发病。弧菌科细菌引起的疾病临床症状复杂,特别是霍乱弧菌(Vibrio cholearae)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、创伤弧菌(Vibrio vulnificus)引起人类严重的腹泻、败血症、伤口感染等传染病,给人类的健康带来巨大威胁。弧菌病(Vibriosis)是由弧菌属细菌引起的一类细菌性疾病,在全球范围内广泛发生,给海水养殖业带来巨大的损失。在目前30多种已确认的弧菌种,有一半以上对海水鱼类、虾和贝类等水产养殖动物具有致病性。也有的弧菌,如溶藻胶弧菌(Vibrio alginolyticus)可以作为有益菌在虾池中存在。为了探索海洋环境中弧菌的多样性规律,比较海水养殖、工业污染对海洋细菌,特别是弧菌多样性的影响,从1999年10月至2000年10月调查了青岛沿岸的养殖密集区、工业污染区、无污染区共6个区域的不同时间、不同环境中基本理化参数、细菌区系组成等情况。结果显示,随着季节的变化海水中细菌数量变化显著,底泥及其他环境中变化不大;不同区域的海水中的细菌数量差异很大。海水养殖密集区海水中的细菌数量平均为1.4×10~4 cfu/mL,工业污染区海区海水中的细菌数量平均为5.4×10~4 cfu/mL,无污染海区的海水中细菌数量平均在10~2 cfu/mL以下,特别是崂山头清洁海区海水中的细菌数量平均在10~1 cfu/mL以下。共分离到540株细菌,其中革兰氏阳性菌78株,阴性菌462株。根据基本生理生化特征把462株革兰氏阴性菌鉴定到属,结果显示所分离到的革兰氏阴性菌绝大多数来源于9个菌群,分别为:气单胞菌属(Aeromonas)、弧菌属(Vibrio)、发光杆菌属(Photobacterium)、假单胞菌属(Pseudomonas)、射光杆菌属(Lucibacterium)、莫拉氏菌属(Moraxella)、黄杆菌属(Flavobacterium)、色杆菌属(Chromobacterium)和嗜纤维菌属(Cytophage)。其中,弧菌科细菌为优势菌群,在鱼体表面高达到83.1%,在工业污染区沉积物中占39.5%,其它环境中都达到50%左右甚至更多;气单胞菌属(Aeromonas)为海水、底泥和海藻表面的优势属,鱼体表面弧菌属(Vibrio)为优势属。青岛近岸不同环境中海洋弧菌的检测及用PCR方法快速检测病原鳗弧菌用BIOLOG-GN系统对428株革兰氏阴性细菌进行了鉴定,322株菌反应结果正常,139株菌鉴定到种,34种鉴定到属。其中弧菌科细菌74株,鉴定到种的59株,包括溶藻胶弧菌(U口lgin口加打‘us)、副溶血弧菌(Fparahaeolyticus)、哈维氏弧菌若u harveyi)等引起人类和海洋动物弧菌病的病原菌。从水产养殖密集区检出了副溶血弧菌、溶藻胶弧菌、哈维氏弧菌、鳖鱼弧菌(U caracharia。)等引起人类疾病的及引起养殖动物弧菌病的致病菌;在工业污染区检出了溶藻胶弧菌、鳖鱼弧菌、梅氏弧菌(U metschnikovii)等病原菌。无污染海区只检测到2株哈维氏弧菌。以鳗弧菌(巧brio anguillarum)金属蛋白酶基因为目标基因,设计了一对特异引物,建立了PCR快速检测鳗弧菌的方法。对34株海洋细菌的检测分析表明,该引物能特异的检测鳗弧菌,其检测DNA模板的最小量为0.Ing。从自然发病的病鱼中检测到6株鳗弧菌;并继续用此方法检测其它海水养殖动物体内和海水环境中病原鳗弧菌的分布情况。……   
[关键词]:弧菌科;弧菌属;鳗弧菌;细菌数量;细菌区系;BIOLOG-GN;PCR
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国海洋大学2003年