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牙鲆(Paralichthys olivaceus)免疫促进机理初探

张玲

  本文围绕维生素C和鳗弧菌减毒活疫苗对牙鲆生长,体成分,特异性和非特异性免疫参数的影响进行了系列研究。整个研究分为四部分,第一部分是通过在饲料中添加不同含量的维生素C,观察其对不同盐度水体中饲养牙鲆的生长,体成分及非特异性免疫参数的影响;第二部分是用不同含量的维生素C,体外处理分离自牙鲆的血液,脾脏和头肾白细胞各48小时,从白细胞呼吸爆发活性的变化来验证维生素C对牙鲆免疫细胞的免疫促进作用;第三部分是用不同含量的维生素C,在体外处理牙鲆肠黏膜白细胞48小时,根据白细胞呼吸爆发活性的变化,验证维生素C对肠黏膜白细胞免疫反应的影响;第四部分是通过鳗弧菌减毒活疫苗对牙鲆特异性和非特异性免疫参数的影响研究,验证该减毒活疫苗的免疫原性、安全性及免疫促进机理,为该减毒活疫苗在生产上的推广应用提供理论依据。研究的主要结果如下:(1)对于同样维生素C含量的饲料而言,不同的水体盐度(16‰、31‰和40‰)对牙鲆的生长显示了差异。在半咸水中(盐度16‰),牙鲆生长最快,而且该盐度还有利于肝脏对维生素C的积累。(2)饲料中添加维生素C,对鱼体成分不产生影响。(3)鱼体粗蛋白和水分含量不受养殖水体盐度的影响,而粗脂肪含量随养殖水体盐度升高显著降低(P<0.05)。鱼体粗灰分含量随养殖水体盐度升高有增加的趋势。(4)在本实验条件下,实验牙鲆血清的替代补体溶血活性(ACH_(50)),不受养殖水体盐度和实验饲料VC含量的影响。(5)实验鱼血清皮质醇浓度受养殖水体盐度影响较大,高盐度(40‰)的养殖水体使生长在其中的鱼产生相对较高的血清皮质醇水平(6.7ng/ml)。饲料中添加适当水平(130mg AA/kg)的维生素C,可使实验鱼血清皮质醇水平降低。(6)实验鱼血清的溶菌酶活性,随实验饲料中VC含量的增加而增强,但受养殖水体盐度的影响不显著。(7)体外处理的牙鲜血液白细胞,其呼吸爆发活性有随vC浓度(购自Sigma公司)的升高而逐渐增强趋势。统计结果表明,当VC浓度为10 umol/L时,呼吸爆发活性显著高于其它VC浓度。但继续增加VC浓度,白细胞的呼吸爆发活性反而降低。(8)体外处理的牙醉头肾白细胞,随VC浓度的升高,其呼吸爆发活性有逐渐增强的趋势。当VC浓度为10 umol/L时,其呼吸爆发活性显著高于其他组。但是,VC浓度继续升高,头肾白细胞的呼吸爆发活性却呈下降趋势。(9)用不同浓度的VC在体外处理牙娜脾脏白细胞时,各处理组之间差异不显著。(10)用不同浓度的VC在体外处理牙娜肠勃膜白细胞后,各处理组之间差异不显著。(11)腹腔注射鳗弧菌减毒活疫苗,能够显著刺激牙娜肠勃膜细胞的呼吸爆发活性。(12)腹腔注射鳗弧菌减毒活疫苗后,牙鲜血液白细胞的呼吸爆发活性有增强的趋势,但未达到统计学的显著水平。(13)腹腔注射鳗弧菌减毒活疫苗,能够提高牙虾血清替代补体溶血活性。(14)腹腔注射鳗弧菌减毒活疫苗,三个月的相对保护率大于70%。(巧)腹腔注射鳗弧菌减毒活疫苗,15天后其血液内毒素(用EDS刁9细菌内毒素测定系统检测血清样品中细菌内毒素的含量,堂试剂灵敏度IPg/ml)减少到检测限之下。(16)供试的鳗弧菌减毒活疫苗,能诱导牙鲜产生很强的免疫应答,是一种抵抗鳗弧菌感染的有效疫苗。本研究的创新性成果主要体现在以下几个方面:(1)提供了有关盐度和维生素C,对牙鲜生长、体成分和非特异性免疫参数影响机理的新资料。发现适当降低养殖海水的盐度(16%0),不仅不会对牙奸产生应激效应,而且还有利于维生素C在肝脏的积累。实验证明,在该盐度下牙醉的生长最快。(2)当高盐(40编)使鱼类产生应激反应时,通过在饲料中添加一定量的维生素C,可以使应激得到缓解。u)首次在体外用不同浓度的维生素C处理从鱼的血液、头肾、脾脏及肠荡膜分离的白细胞,并验证了维生素C对不同部位白细胞的呼吸爆发活性的影响。为免疫促进剂的机理研究提供了新的思路和方法。N)首次较全面的阐明了鳗弧菌减毒活疫苗对牙解特异和非特性免疫指标的影响结果,为这种新型疫苗在生产上的推广应用提供了基本的理论依据。……   
[关键词]:维生素C;兔疫参数;减毒活疫苗;牙鲆(Paralichthys olhaceus)
[文献类型]:博士论文
[文献出处]:中国海洋大学2003年