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地龙肽对小鼠免疫功能的影响

唐小云

  前言地龙俗称蚯蚓,别名“地龙子”、“曲蟮”,系环节动物。其味咸性寒,具有清热、平肝、定惊、止喘、通络之功效。临床上用地龙或其复方治疗细菌病毒感染性疾病以及易于并发感染的严重的皮肤烧烫伤效果显著,结合其对某些肿瘤以及一些免疫相关性疾病如难治性微小病变肾病、特发性血小板减少性紫癜、系统性红斑狼疮显著的疗效,一般认为地龙对机体免疫功能具有调节作用。已有实验研究证明地龙提取物能抑制MGC803人胃癌细胞株、Hep-2人喉癌细胞株、S180腹水瘤、Yak-1、急淋等瘤细胞的生长。但对K562、HL60及急粒细胞却具有刺激生长的作用。张凤春等在1997年证实鲜地龙提取液能显著提高巨噬细胞活化率,增加细胞表面Fc受体的数量,促进吞噬细胞吞噬功能。地龙制剂“912”(后制成胶囊)可以增强NK细胞活性,降低荷瘤昆明鼠S180实体瘤瘤重,预防因辐射引起的脾细胞数下降,防止荷瘤小鼠胸腺细胞数和胸腺重量的减少。能明显增强MMC对S180移植瘤的细胞毒作用。林少琴等证实蚯蚓提取物QY-1能显著增强小鼠巨噬细胞的吞噬功能,提高荷瘤小鼠的脾指数和胸腺指数,并能增加小鼠血中CAT、SOD和GSH-Px三种抗氧化酶的活性。认为QY可能通过增强小鼠免疫功能,清除自由基、抗脂质过氧化作用,从而抑制肿瘤的生长。地龙体内具有多种活性物质,可因提取的工艺不同可提取出不同的组分,因而具有不同的功能。地龙应用的局限性是地龙提取物纯度低,而且直接从其抗菌、抗病毒以及杀伤肿瘤的角度出发。地龙在免疫药理方面发展前途是从地龙体内提取出纯度高的活性强的使用方便的小分子免疫活性物质,通过调节机体免疫功能治疗感染性、免疫性疾病和肿瘤。基于这一思想,我们实验室从新鲜正蚓科赤子爱胜蚓体内提取了是由几种8000-20000Dal的多肽组成具有免疫活性的多肽混合物,命名为地龙肽门umbricuspeptide,LP人本品纯度较高,体外经检测具有能提高E花环形成能力的生物学活性。本实验室人员已经证实地龙肽在体外可明显提高小鼠NK细胞的杀伤率,桔抗环磷酸胺、地塞米松对NK细胞活性的抑制作用,增强巨噬细胞的吞饮功能。在这一研究基础之上,我们从细胞和分子两个水平继续探讨地龙肽对机体免疫功能的影响,并初步探索了地龙肽的作用机制。实验材料与方法1 材料及仪器1.l 地龙肽:由本实验室制备,冻于品为棕红色,絮状粉末,用时以蒸馏水或含10%**S**M二M的溶解。1.2 动物:C57Br6纯系小鼠,体重 20。Zg,4-6周龄,雌雄各半,购于中国医科大学实验动物部。*3 细胞系:小鼠成纤维瘤细胞(L929人1.4 其他材料:10%FCS RPMll640、细菌脂多糖(LPS人刀豆蛋白A*ond人放线菌素D*L-2标准品*NF-a标准品人试剂、二甲基亚巩(DMSOX24孔s6孔细胞培养板加’IT等。1.5 仪器:Bio-TEKELX800酶标仪、OlympusCK40相差显微镜、Aggottingen BPZllD电子天平、Hitachi 05PR一22离心机、德国Kendro Hera公司 COZ培养箱等。.2 方法2.二 动物分组及给药方法正常对照组:每日蒸馏水0.ZInl,连续7日灌胃;·2·地龙肽大剂量组:每日 1*Inl LP 0.Zml,连续 7日灌胃;地龙肽中剂量组:每日O.sin矿du o.ZM,连续7日灌胃;地龙肽小剂量组:每日 0.ling/Inl LPO.ZInl,连续7日灌胃;环磷酸胺组:每日蒸馏水0.ZInl灌胃,并于第三日肌注环磷酸胺100mg/kg;环磷酸胺十地龙肽组:每日0.5二矿M地龙肽0.ZInl,连续7日灌胃,并于第三日肌注环磷酸胺 100mg/kg。2.2 腹腔巨噬细胞细胞毒功能测定采用p29靶细胞法。2.3 NO测定 采用重氮化反应方法。2.4 TNF-a测定 采用o29细胞作为敏感细胞。2.5 淋巴细胞增殖试验 采用MTVf法。2.6 IL-2的检测 采用ConA活化的小鼠脾细胞作为依赖细胞株。实验结果1.地龙肽对正常小鼠及免疫抑制小鼠巨噬细胞细胞毒效应的影响与正常对照组相比较,地龙肽0.5刀.ling/rnl组巨噬细胞细胞毒性百分率明显升高,与正常对照组相比较具有统计学意义瞩<0.of人环磷酸胺十r组巨噬细胞细胞毒性功能得到明显提高,与环磷酚胺组相比较,P打).01。2.地龙肽对正常小鼠及免疫抑制小鼠巨噬细胞、脾细胞分泌NO的影响地龙肽0.5刀.lin矿M可明显提高巨噬细胞自发及经LPS诱生分泌N0的水平(P<o.01〕。与环磷酸胺组相比较,环磷酸胺十LP组可明显提高巨噬细胞自发及经LPS诱生分泌NO的水平。地龙肽 0.ling/Inl组脾细胞自发及经LPS诱生分泌NO水平明显升·3·高,与正常对照组相比较P<0.01。与环磷酸胺组相比较,环磷酸胺十LP组脾细胞自发及经LP S诱生分泌*O水平明显提高门<0.of人甚至超过了正常对照组。3.地龙肽对正常小鼠及免疫抑制小鼠巨?……   
[关键词]:地龙肽;巨噬细胞细胞毒效应;NO;TNF-α;IL-2;淋巴细胞增殖反应
[文献类型]:硕士论文
[文献出处]:中国医科大学2003年